3.2. Вторая система.

Из 50 предполагаемых нуклеопоринов (Nup), входящих в состав ядерной поры высших эукариот, в настоящее время описано около 40 белков, 25 из которых уже секвенированы. Практически все белки ядерной поры охарактеризованы дрожжей (30 белков), а экспериментальные данные, полученные на высших организмах, являются малочисленными. Распределение многих нуклеопоринов на различных структурных компонентах поры было изучено иммуногистохимически с использованием антител к этим белкам.

Установлено, что белки ЯПК можно условно разделить на 3 группы: первая содержит в своем составе белки со специфическими повторяющимися последовательностями (типа FXFG и др.), которые узнаются биохимическими факторами; вторая содержит белки, не имеющие таких последовательностей, а третья включает так называемые интегральные белки, локализующиеся либо в мембране ядерной оболочки, формирующей пору, либо в участке поры, находящемся в просвете между ядерными мембранами. Сравнительный анализ нуклеопоринов у высших и низших эукариот показал наличие 30-50% гомологии для 4 пар белков: Nup62/Nsp1p; Nup107/Nup84; Nup155/Nup170; Nup98/Nup116 (первыми в парах указаны белки высших, вторыми - белки низших эукариот; названия белков приводятся согласно общепринятой в литературе классификации). В последнее время было установлено, что нуклеопорины могут образовывать сложные комплексы, состоящие из 5-7 белков, что, вероятно, отражает их участие в формировании индивидуальных компонентов поры. Некоторые из нуклеопоринов, такие, как Nup188, Nup170, Nup157, Nic 96, POM152 составляют до 25% массы ядерных пор и присутствуют в 10-20 копиях на одну пору.

 Получены доказательства того, что нуклеопорины принимают непосредственное участие в регуляции транспорта молекул через ЯПК. Благодаря их взаимному контакту, а также взаимодействию с биохимическими факторами, несущими транспортируемую молекулу, они могут обеспечивать ее последовательную передачу, подобно эстафетной палочке, из одного участка ядерной поры в другой. Некоторые из нуклеопоринов могут, очевидно, напрямую связываться с транспортируемой молекулой. Так, например, Nup153 и Nup98, входящие в состав баскет-фибрилл, содержат РНК-связывающие домены, а Nup358 и CAN/Nup214, располагающиеся на цитоплазматических фибриллах поры, узнают сигнальные последовательности некоторых белков. Транспорт молекул через центральные компоненты поры находится под контролем белка Nup62, который является самым представительным и распределен вдоль всего центрального канала.

3.3. Третья система.

Использование высокоразрешающего сканирующего электронного микроскопа позволило впервые зафиксировать конформационные изменения индивидуальных компонентов ЯПК в процессе молекулярного транспорта. Было показано, что экспорт гигантской мРНК, синтезируемой генами колец Бальбиани у хирономуса, сопровождается циклической реорганизацией баскета и транспортера, функционирующих, как система открывающихся и закрывающихся диафрагм.

 Согласно наблюдениям, сделанным нами в сканирующем электронном микроскопе, в неактивной поре оба входа в центральный канал поры закрыты периферическими гранулами транспортера. Кроме того, вход в пору со стороны ядра дополнительно закрыт фибриллами баскета. На первом этапе экспорта молекула РНК, упакованная в процессе транскрипции с белками в 50 нм РНП частицу, перемещается внутри ядра к поре и прикрепляется к верхушке баскета. Предполагается, что Nup153 и Nup98, входящие в состав баскета, принимают активное участие в этом событии. Баскет-фибриллы формируют увеличивающееся в размере кольцо, которое постепенно захватывает частицу, и она погружается внутрь баскета. Поскольку максимальный диаметр центрального канала ЯПК составляет всего 26 нм, РНП частица внутри баскета декомпактизуется в 26 нм фибриллу. Было также обнаружено, что РНП частица вращается внутри баскета, что, вероятно, связано с необходимостью ее транспортировки в пору 5’-концом. Таким образом, баскет структура выполняет как бы роль “таможни”, проверяя и подготавливая молекулу РНП к транспорту через пору.

 На следующем этапе в периферической грануле транспортера со стороны ядра открывается отверстие и РНП фибрилла начинает перемещаться внутрь поры. Внутренний диаметр центральных цилиндров транспортера, имевший до этого размер 10 нм, расширяется до 26 нм, и фибрилла транспортируется через них дальше, в сторону цитоплазмы. Периферическая гранула транспортера со стороны цитоплазмы также формирует отверстие диаметром 26 нм, и РНП фибрилла постепенно полностью выходит в цитоплазму, где начинается процесс трансляции. После окончания транспорта все компоненты ЯПК быстро возвращаются в исходное состояние. Было установлено, что в процессе транспорта периферические гранулы транспортера могут перемещаться в вертикальном направлении на 5 нм, а сама пора - уплощаться или вытягиваться, способствуя, таким образом, более эффективному перемещению транспортируемой молекулы. Все эти данные свидетельствуют о том, что ЯПК является очень пластичной и динамичной структурой, непосредственно участвующей в регуляции транспорта. Вместе с тем следует отметить, что в последние годы появились данные о том, что пора может активно транспортировать до 300 и более небольших молекул в секунду. Это предполагает наличие каких-то дополнительных и пока неизвестных нам механизмов обеспечивающих такую высокую скорость перемещения молекул через пору. Поскольку пора с одной стороны тесно связана с ламиной и, следовательно, с ядерным матриксом, а с другой - через ядерную оболочку с цитоскелетом, процесс транспорта через ЯПК может также регулироваться на уровне этих внутриклеточных структур.