- •Ядрышко.
- •1.1.1.Метод серебрения.
- •1.1.4. Электронная микроскопия.
- •1.1.5. Метод молекулярной гибридизации in situ.
- •1.1.6. Выделение ядрышек.
- •1.2. Физические и химические свойства ядрышка.
- •2. Ультраструктурное строение ядрышка.
- •2.1. Фибриллярный центр (фц).
- •2.2. Плотный фибриллярный компонент (пфк).
- •2.3. Гранулярный компонент.
- •2.4. Околоядрышковый хроматин (охр).
- •2.5. Матрикс ядрышка.
- •2.6.Ядрышковая вакуоль («nucleolar vacuole»).
- •3. Функции ядрышка. Связь структуры и функций.
- •3.4. Некоторая роль в биосинтезе srp.
- •3.6. Тельца Кахаля.
- •Связь структуры и функций.
- •Динамичность ядрышка.
- •4. Белки ядрышка.
- •4.1. Аминокислотный состав ядрышка.
- •4.2. Специфические ядрышковые белки.
- •5. Строение и функционирование генов рРнк.
- •Гены класса I. Экспрессия.
- •Процессинг рРнк.
- •Гены 5s-рРнк.
- •6. Классификация ядрышек.
- •6.1. Нуклеолонемные ядрышки.
- •6.2. Ретикулярные ядрышки.
- •6.3. Вакуализированные ядрышки.
- •6.4. Кольцевидные ядрышки.
- •6.5. Ядрышки типа кора-сердцевина.
- •6.6. Компактные ядрышки.
- •6.7. Сегрегированные ядрышки.
- •6.8. Плотные фибрилляторные ядрышки.
- •6.9. Свободные фц.
- •6.10. Промежуточные типы ядрышек.
- •6.10.1. Нуклеолонемно-вакуолизированные (нуклеолонемно-кольцевидные) ядрышки.
- •6.10.2. Псевдонуклеолонемные ядрышки.
- •7. Ядрышко и клеточный цикл.
- •8. Морфогенез ядрышка.
- •8.2. Морфогенез ядрышка вследствие частичной гепатэктомии мышей и крыс.
- •Ядерно-поровый комплекс.
- •Описанные ниже структурная организация япк и транспорт через япк (пункты 1,2,3,6) были взяты из обзора е.В. Кисилевой (Институт цитологии и генетики со ран, Новосибирск).
- •С труктурная организация.
- •2.Транспорт через ядерную пору.
- •3. Регуляция транспорта молекул через ядерную пору.
- •3.1. Первая система.
- •3.2. Вторая система.
- •3.3. Третья система.
- •4. Импорт.
- •4. 1. Рецепторы импорта ядерных белков (импортины).
- •4.2. Ядерные белки: импорт, nls-зависимый механизм.
- •4. 3. Ядерные белки: импорт, nls-независимые механизмы.
- •5. Экспорт.
- •6.Сборка ядерных пор in vitro происходит через интермедиаты.
- •Ядерно-белковый матрикс.
- •Препараты и микрофотографии.
- •1. Препараты.
- •1. Включение 3нт в клетки культуры спэв. Расчет пролиферативного пула.
- •2. Включение 3ну в клетки культуры спэв.
- •3. Ооциты рыб. Амплификация ядрышка.
7. Ядрышко и клеточный цикл.
В G1-, S- и G2-периодах происходит увеличение транспорта рРНК из ядра в цитоплазму; вероятно, что образование вакуоли связано именно с этим процессом. В середине S- и G2-периодов некоторые кольцевидные ядрышки трансформируются в компактные. Последние также подвергаются некоторым изменениям, которые заключаются в уменьшении концентрации и содержания РНК.
На примере опухолевых клеток Эрлиха было выявлено, что в G2-фазе объем ядра и ядрышек практически в 2 раза больше, чем в G1-периоде. Для сравнения: объем ядрышек в G1-периоде в опухолевых клетках Эрлиха составляет 49,18мкм 3 , в S-периоде – 88,121мкм 3, а в G2-периоде – 92,89мкм 3. Эти наблюдения в дальнейшем подтвердились Зацепиной и др. (1989): в диплоидных проэритробластах (G1) суммарный объем ядрышек в 1,7 раза больше, чем в тетраплоидных (G2).Таким образом можно предположить, что суммарные объемы ФЦ пропорциональны плоидности клетки, то есть числу содержащихся в ней рибосомных генов (ядрышкообразующих хромосом – ЯОР). Однако, число ФЦ не образует строгой корреляции с плоидностью клетки.
8. Морфогенез ядрышка.
8.1. Морфогенез ядрышка в процессе терминальной дифференциации эритробластов.
На примере эритробластов удается проследить все переходные этапы трансформации ядрышка, связанные с прекращением транскрипции ДНК, входящей в состав ЯОР, расходованием РНП в условиях отсутствия продукции новосинтезированной РНК и разборкой ядрышка. Процесс инактивации ядрышка сопровождается увеличением зон ОХР, уменьшением размеров ядрышка, редукцией гранул, укрупнением ФЦ и уменьшением их числа. Так, число ФЦ в проэритробласте почти в 30 раз превышает число ФЦ в нормобласте, а средний диаметр ФЦ в нормобласте в 2 раза больше, чем в проэритробласте; при этом суммарный объем ФЦ на клетку в 3,5 раза выше в проэритробласте по сравнению с нормобластом.
Это подтверждает ранее высказанную гипотезу о механизме возникновения в интерфазных ядрышках крупных ФЦ и кольцевидных ядрышек вследствие прекращения работы генома (в том числе и ядрышковых генов) и расходования рибонуклеопротеидной (РНП) части. Конечной формой превращения ядрышка в высоко специализированных клетках считается кольцевидное ядрышко с центрально расположенным ФЦ. То есть, возможно, что инактивация ядрышка при эритропоэзе сопровождается слиянием индивидуальных ФЦ и, может быть, и уплотнением их материала. Однако, против слияния ФЦ говорит тот факт, что уменьшение числа ФЦ в процессе эритропоэза сопровождается и уменьшением их суммарный объемов. С другой стороны, уменьшение суммарного объема ФЦ может быть вызвано потерей их белкового компонента (например, РНК-полимеразы I). Таким образом, на примере морфогенеза ядрышка в процессе терминальной дифференцировки эритробластов можно проследить зависимость структурной организации ядрышка от его функциональной активности.
Кроме того, было показано, что в активных ядрышках проэритробластов общее число ФЦ коррелирует с плоидностью клетки и в несколько раз превышает количество ядрышкообразующих районов хромосом. Это означает, что в активных ядрышках один ЯОР образует более одного ФЦ. При этом суммарные объемы ФЦ в нормобластах втрое меньше, чем в проэритробластах, хотя средние объемы индивидуальных ФЦ выше в нормобластах. Вероятно, что инактивация ядрышек при эритропоэзе сопровождается слиянием индивидуальных ФЦ и, возможно, уплотнением их материала.