- •Ядрышко.
- •1.1.1.Метод серебрения.
- •1.1.4. Электронная микроскопия.
- •1.1.5. Метод молекулярной гибридизации in situ.
- •1.1.6. Выделение ядрышек.
- •1.2. Физические и химические свойства ядрышка.
- •2. Ультраструктурное строение ядрышка.
- •2.1. Фибриллярный центр (фц).
- •2.2. Плотный фибриллярный компонент (пфк).
- •2.3. Гранулярный компонент.
- •2.4. Околоядрышковый хроматин (охр).
- •2.5. Матрикс ядрышка.
- •2.6.Ядрышковая вакуоль («nucleolar vacuole»).
- •3. Функции ядрышка. Связь структуры и функций.
- •3.4. Некоторая роль в биосинтезе srp.
- •3.6. Тельца Кахаля.
- •Связь структуры и функций.
- •Динамичность ядрышка.
- •4. Белки ядрышка.
- •4.1. Аминокислотный состав ядрышка.
- •4.2. Специфические ядрышковые белки.
- •5. Строение и функционирование генов рРнк.
- •Гены класса I. Экспрессия.
- •Процессинг рРнк.
- •Гены 5s-рРнк.
- •6. Классификация ядрышек.
- •6.1. Нуклеолонемные ядрышки.
- •6.2. Ретикулярные ядрышки.
- •6.3. Вакуализированные ядрышки.
- •6.4. Кольцевидные ядрышки.
- •6.5. Ядрышки типа кора-сердцевина.
- •6.6. Компактные ядрышки.
- •6.7. Сегрегированные ядрышки.
- •6.8. Плотные фибрилляторные ядрышки.
- •6.9. Свободные фц.
- •6.10. Промежуточные типы ядрышек.
- •6.10.1. Нуклеолонемно-вакуолизированные (нуклеолонемно-кольцевидные) ядрышки.
- •6.10.2. Псевдонуклеолонемные ядрышки.
- •7. Ядрышко и клеточный цикл.
- •8. Морфогенез ядрышка.
- •8.2. Морфогенез ядрышка вследствие частичной гепатэктомии мышей и крыс.
- •Ядерно-поровый комплекс.
- •Описанные ниже структурная организация япк и транспорт через япк (пункты 1,2,3,6) были взяты из обзора е.В. Кисилевой (Институт цитологии и генетики со ран, Новосибирск).
- •С труктурная организация.
- •2.Транспорт через ядерную пору.
- •3. Регуляция транспорта молекул через ядерную пору.
- •3.1. Первая система.
- •3.2. Вторая система.
- •3.3. Третья система.
- •4. Импорт.
- •4. 1. Рецепторы импорта ядерных белков (импортины).
- •4.2. Ядерные белки: импорт, nls-зависимый механизм.
- •4. 3. Ядерные белки: импорт, nls-независимые механизмы.
- •5. Экспорт.
- •6.Сборка ядерных пор in vitro происходит через интермедиаты.
- •Ядерно-белковый матрикс.
- •Препараты и микрофотографии.
- •1. Препараты.
- •1. Включение 3нт в клетки культуры спэв. Расчет пролиферативного пула.
- •2. Включение 3ну в клетки культуры спэв.
- •3. Ооциты рыб. Амплификация ядрышка.
Занятие №7.
Клеточное ядро.
Ядрышко. Ядерная оболочка.
Ядерный поровый комплекс.
Ядрышко.
1. Свойства ядрышка.
1.1. Методы изучения.
1.1.1.Метод серебрения.
Соли серебра имеют специфическое сродство к некоторым белкам ядрышка. Т акое сродство ядрышек к солям серебра называют аргентофилией. Аргентофилия характерная для белков, обогащенных сульфгидрильными, дисульфидными связями. Ядрышки могут восстанавливать серебро из различных растворов: нитрата серебра, «аммиачного серебра», протеинатов серебра. При этом происходит отложение темных осадков исключительно в ядрышках интерфазных клеток, а также в ЯОР на митотических хромосомах.
1.1.4. Электронная микроскопия.
1.1.5. Метод молекулярной гибридизации in situ.
Является более точным методом для определения ядрышковых организаторов по сравнению с методом серебрения. Описание технологии гибридизации in situ предложено в статье Heliot et al (1997).
1.1.6. Выделение ядрышек.
В связи с тем, что ядрышки, фактически, являются частью хромосом, их выделение затруднено. Для этого используют ультразвук с последующей седиментацией.
1.2. Физические и химические свойства ядрышка.
Ядрышко – наиболее плотный компонент клетки. Коэффициент преломления для гепатоцитов составляет 1,587. Такое свойство ядрышка объясняется высокой концентрацией в нем химических соединений. Высокая плотность ядрышка обуславливает не только сильное преломление световых лучей, но и сильное поглощение β-лучей.
Материал ядрышка состоит из 3 классов веществ: ДНК, РНК и белков. Белки составляют 70-80% от сухого веса ядрышка; такое большое содержание белка и определяет его высокую электронную плотность. Кроме белков, входящих в состав РНП-частиц, в ядрышке встречаются белки, не связанные с частицами. К ним относятся: кислые белки (фосфопротеиды), гистоновые белки, ферменты (нуклеозидтрансфераза, щелочная фосфатаза, АТФ-аза и др.). Особая роль принадлежит РНК-полимеразе-I.
РНК составляет около 10% (5-14%) веса ядрышка и обуславливает характерную базофилию ядрышка на гистологических препаратах; ДНК составляет 2-12%.
Содержание РНК, ДНК и белка в изолированных ядрышках (сухой вес в %)
-
Объект
РНК
ДНК
Белок
РНК/ДНК
Печень крысы
11,0
8,0
78,0
1,4
Регенерирующая печень (6 ч)
7,6
4,6
87,8
1,7
Регенерирующая печень (18 ч)
15,5
5,4
79,1
2,9
Печень морской свинки
4,1
9,5
86,4
0,43
Стебель гороха (4 дня)
15,11
10,6
74,0
1,5
Проростки гороха (36 ч)
16,7
6,4
76,9
2,6