3.1.5. Подготовка контрольных образцов

Положительный контрольный образец дан в рабочем разведении и не требует дополнительного разведения.

Для приготовления рабочего раствора отрицательного контрольного образца указанный на этикетке соответствующего флакона объем контрольного образца добавляют к 1 мл раствора для разведения сывороток.

Для приготовления рабочего раствора диагностического контрольного образца для разных антигенов указанный в таблице на странице 10 объем добавляют к 1 мл раствора для разведения сывороток.

Хранение: рабочие растворы контрольных отрицательного и диагностического образцов хранению не подлежат.

Антиген	Аликвота, мкл
описторхисов
трихинелл
токсокар
эхинококков

3.1.6. Подготовка исследуемых сывороток

Исследуемые сыворотки развести раствором для разведения сывороток в соотношении 1:100, используя вспомогательные ряды пробирок или лунок дополнительного планшета для микротитрования (в комплект тест-системы не входит). При скрининге сывороток контрольные и исследуемые образцы используют в этом разведении.

При тестировании проб сывороток в восьми последовательных двукратных разведениях их готовят для всех сывороток на растворе для разведения сывороток в интервале от 1:100 до 1:12800, для чего используют вспомогательные ряды пробирок или лунок планшета для микротитрования.

Хранение: разведённые образцы сывороток хранению не подлежат.

3.2. Проведение иммуноферментного анализа

3.2.1. Подготовка стрипов

В упаковке стрипы должны быть выдержаны 30 мин при температуре 18-25°С для предотвращения конденсации влаги на стрипах.

Для проведения ИФА рассчитать необходимое количество стрипов, оставшиеся стрипы упаковать в пакет, удалить из него воздух и плотно закрыть.

Стрипы закрепить в рамке. В лунки стрипов, заполняя их до краев, внести рабочий раствор ФСБ-Т. Стрипы выдержать 1-2 мин при температуре 18-25°С, затем содержимое лунок слить, остатки влаги удалить, постукивая перевернутыми стрипами по фильтровальной бумаге.

Стрипы стабильны после первого вскрытия пакета в течение всего срока годности набора при 2-8°С.

3.2.2. Внесение контрольных и исследуемых образцов

При тестировании сывороток в одном разведении (скрининге) в лунки стрипов внести по 100 мкл контрольных (см. п. 3.1.5) и исследуемых образцов (см. п. 3.1.6). В лунки, предназначенные для контроля конъюгата, внести по 100 мкл раствора для разведения сывороток. Рекомендуется использовать для каждого образца две отдельные лунки. Следует обратить внимание на то, что для каждого используемого антигена все контрольные образцы (положительный, отрицательный и диагностический и контроль конъюгата) определяются отдельно.

При определении титра антител приготовить двукратные разведения исследуемых сывороток. В лунки горизонтального ряда А внести по 200 мкл разведения 1:100 исследуемых сывороток. В лунки рядов В-Н внести по 100 мкл раствора для разведения сывороток. Каждую сыворотку титровать, перенося по 100 мкл раствора из лунок предыдущего ряда в лунки последующего от А до Н, тщательно перемешивая пипетированием. После раститровки из каждой лунки последнего ряда Н удалить в дезраствор по 100 мкл раствора, оставляя в лунках по 100 мкл. Контрольные образцы внести в лунки как при скрининге.

Стрипы закрыть пленкой и выдержать 30 мин при температуре (37±1)°С.

Содержимое лунок удалить в дезраствор, лунки промыть 3 раза рабочим раствором ФСБ-Т и дважды дистиллированной водой, каждый раз добавляя в лунки не менее, чем по 200 мкл жидкости, остатки влаги удалить постукиванием по фильтровальной бумаге.