Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
зачот / тест-ситема.doc
Скачиваний:
5
Добавлен:
17.12.2019
Размер:
108.54 Кб
Скачать

D-3354

Тест-система Иммуноферментная для выявления антител к антигенам гельминтов Инструкция по применению

Тест-система иммуноферментная представляет собой набор реагентов для выявления иммуноглобулинов класса G (IgG) к антигенам гельминтов. Активными компонентами тест-системы являются антигены гельминтов, адсорбированные в лунках планшетов; иммуноглобулины против IgG человека, меченные пероксидазой хрена; контрольные положительный, отрицательный и диагностический образцы.

Способ определения антител к антигенам гельминтов представляет собой твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), в ходе которого при взаимодействии исследуемых образцов сывороток крови с иммобилизованными в лунках планшетов антигенами гельминтов происходит связывание специфических антител и образование комплекса “антиген-антитело” на поверхности лунок. После удаления несвязавшихся компонентов сыворотки и добавления в лунки планшета конъюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой хрена происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментативной реакции, проведенной в лунках, отмытых от избытка конъюгата, с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и тетраметилбензидин (ТМБ), образуется окрашенный продукт, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации IgG к антигенам гельминтов в анализируемом образце сыворотки.

Набор рассчитан на 192 определения, включая контроли.

При скрининге сывороток на наличие в них IgG к антигенам гельминтов рекомендуется использовать их разведение 1:100 и наносить исследуемые образцы в дублях. При определении титра антител рекомендуется использовать последовательные двукратные разведения сывороток в интервале от 1:100 до 1:12800.

1. Назначение

Тест-система предназначена для:

  • выявления в сыворотке человека иммуноглобулинов класса G к антигенам гельминтов;

  • оценки эффективности специфической терапии;

  • научно-исследовательских работ, связанных с изучением патогенеза и эпидемиологии распространенных гельминтозов человека.

2. Состав набора

  • стрипы, иммобилизованные антигенами описторхисов – 6 шт.;

  • стрипы, иммобилизованные антигенами трихинелл – 6 шт.;

  • стрипы, иммобилизованные антигенами токсокар – 6 шт.;

  • стрипы, иммобилизованные антигенами эхинококков – 6 шт.;

  • конъюгат, концентрат (антитела против IgG человека, меченные пероксидазой хрена) – 1 фл., 2,5 мл;

  • положительный контрольный образец, инактивированный (К+) – 1 фл., 2,5 мл;

  • отрицательный контрольный образец, инактивированный (К) – 1 фл., 3 мл;

  • диагностический контрольный образец, инактивированный (Кд) – 1 фл., 3 мл;

  • концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т) – 2 фл. по 28 мл;

  • раствор для разведения сывороток, концентрат – 1 фл., 30 мл;

  • раствор для разведения ТМБ – 2 фл. по 13,0 мл;

  • тетраметилбензидин (ТМБ), концентрат – 2 фл. по 1 мл;

  • стоп-реагент – 2 фл. по 12 мл;

  • пленка для заклеивания стрипов – 4 шт.;

  • кювета – 1 шт.;

  • наконечники для пипеток – 8 шт.;

  • рамка для закрепления стрипов – 1шт.;

  • инструкция по применению – 1 шт.

 

3. Способ применения

Образцы сыворотки крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл отбирают из вены или из пальца натощак. Сыворотку тщательно отделяют от сгустка и примеси эритроцитов. Сыворотки хранят при температуре 2-8°С или замораживают при температуре минус 20°С, если они не могут быть исследованы в течение 48 ч. Не рекомендуется оттаивание и замораживание образцов более одного раза.

При анализе исследователь может использовать весь набор иммобилизованных на стрипах антигенов гельминтов либо отдельные антигены, в зависимости от поставленной задачи.

Следует обратить внимание на точное дозирование и тщательное перемешивание сывороток с раствором, используемым для их разведения. Для внесения компонентов в лунки планшетов используют пипеточные дозаторы с погрешностью измерения объёмов не более 5%, для промывания лунок планшета можно использовать ручные, автоматические промыватели, а также восьми- или двенадцатиканальные пипеточные дозаторы.

Все растворы используют подогретыми до температуры 18–25°С.

От соблюдения этих требований зависит точность и воспроизводимость результатов анализа.

Внимание! В комплект набора входит пленка для заклеивания стрипов при инкубации в термостате растворов сывороток и конъюгата. При использовании одного или нескольких стрипов следует отрезать полоску пленки нужного размера и клейкой стороной закрыть все лунки. При извлечении стрипов из термостата пленку удалить и поместить в дезинфицирующий раствор.

Пленка предназначена для одноразового использования.

3.1. Приготовление реагентов(для проведения анализа на 8 стрипах

3.1.1. Приготовление рабочего раствора ФСБ-Т

(Использовать для отмывки лунок стрпов и разведения конъюгата)

Рабочий раствор ФСБ-Т готовить из концентрата ФСБ-Т. Для этого 16 мл концентрата ФСБ-Т из флакона разводят до 400 мл дистиллированной водой (см. таблицу на стр. 8). При наличии в исходном концентрате осадка солей его необходимо подогреть при температуре (37±1)°C до полного растворения осадка.

Хранение: не более 48 ч при 2-8°С.

3.1.2. Приготовление раствора для разведения сывороток

Раствор для разведения сывороток готовят из концентрата раствора для разведения сывороток. Для этого к 10 мл концентрата добавить 30 мл рабочего раствора ФСБ-Т и тщательно перемешать.

Хранение: в течение недели при 2-8°С.

3.1.3. Приготовление рабочего раствора конъюгата

Готовить непосредственно перед использованием!

Для приготовления рабочего раствора конъюгата 0,8 мл концентрата конъюгата добавить к 8,0 мл рабочего раствора ФСБ-Т (см. таблицу на стр. 8).

Хранение: рабочий раствор конъюгата хранению не подлежит.

3.1.4. Приготовление раствора ТМБ

Готовить непосредственно перед использованием!

Для этого из флакона с концентратом ТМБ отобрать аликвоту 560 мкл и добавить к 8 мл раствора разведения для ТМБ (см. таблицу на стр. 8), прогретого до температуры 18-25°С, тщательно перемешать. При приготовлении раствора ТМБ следует исключить воздействие света (например, обернуть флакон фольгой).

Хранение: до 20 мин при температуре 18-25°С в темноте.

Внимание! В состав набора входят кювета и наконечники для пипетки, которые следует использовать только для работы с раствором ТМБ. Посуду и пипетки (наконечники), контактирующие с раствором ТМБ, нельзя отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к неконтролируемому разложению ТМБ в ходе реакции. После работы посуду и наконечники ополоснуть водой, промыть 70% этиловым спиртом и тщательно отмыть дистиллированной водой.

Количество одновременно используемых стрипов

Рабочий раствор ФСБ-Т

Раствор конъюгата

Раствор ТМБ

Концентрат ФСБ-Т, мл

Вода дистил., мл

Концентрат конъюгата, мл

Рабочий раствор ФСБ-Т, мл

Концентрат ТМБ, мкл

Раствор для разведения ТМБ, мл

1

2,0

До 50

0,1

1,0

70

1,0

2

4,0

До 100

0,2

2,0

140

2,0

3

6,0

До 150

0,3

3,0

210

3,0

4

8,0

До 200

0,4

4,0

280

4,0

5

10,0

До 250

0,5

5,0

350

5,0

6

12,0

До 300

0,6

6,0

420

6,0

7

14,0

До 350

0,7

7,0

490

7,0

8

16,0

До 400

0,8

8,0

560

8,0

9

18,0

До 450

0,9

9,0

630

9,0

10

20,0

До 500

1,0

10,0

700

10,0

11

22,0

До 550

1,1

11,0

770

11,0

12

24,0

До 600

1,2

12,0

840

12,0

 

Соседние файлы в папке зачот