- •1. Назначение
- •2. Состав набора
- •3. Способ применения
- •3.1. Приготовление реагентов(для проведения анализа на 8 стрипах
- •3.1.5. Подготовка контрольных образцов
- •3.1.6. Подготовка исследуемых сывороток
- •3.2. Проведение иммуноферментного анализа
- •3.2.1. Подготовка стрипов
- •3.2.2. Внесение контрольных и исследуемых образцов
- •3.2.3. Внесение раствора конъюгата
- •3.2.4. Внесение раствора тмб
- •4. Регистрация и оценка результатов
- •5. Условия хранения и транспортирования
D-3354
Тест-система Иммуноферментная для выявления антител к антигенам гельминтов Инструкция по применению
Тест-система иммуноферментная представляет собой набор реагентов для выявления иммуноглобулинов класса G (IgG) к антигенам гельминтов. Активными компонентами тест-системы являются антигены гельминтов, адсорбированные в лунках планшетов; иммуноглобулины против IgG человека, меченные пероксидазой хрена; контрольные положительный, отрицательный и диагностический образцы.
Способ определения антител к антигенам гельминтов представляет собой твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), в ходе которого при взаимодействии исследуемых образцов сывороток крови с иммобилизованными в лунках планшетов антигенами гельминтов происходит связывание специфических антител и образование комплекса “антиген-антитело” на поверхности лунок. После удаления несвязавшихся компонентов сыворотки и добавления в лунки планшета конъюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой хрена происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментативной реакции, проведенной в лунках, отмытых от избытка конъюгата, с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и тетраметилбензидин (ТМБ), образуется окрашенный продукт, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации IgG к антигенам гельминтов в анализируемом образце сыворотки.
Набор рассчитан на 192 определения, включая контроли.
При скрининге сывороток на наличие в них IgG к антигенам гельминтов рекомендуется использовать их разведение 1:100 и наносить исследуемые образцы в дублях. При определении титра антител рекомендуется использовать последовательные двукратные разведения сывороток в интервале от 1:100 до 1:12800.
1. Назначение
Тест-система предназначена для:
-
выявления в сыворотке человека иммуноглобулинов класса G к антигенам гельминтов;
-
оценки эффективности специфической терапии;
-
научно-исследовательских работ, связанных с изучением патогенеза и эпидемиологии распространенных гельминтозов человека.
2. Состав набора
-
стрипы, иммобилизованные антигенами описторхисов – 6 шт.;
-
стрипы, иммобилизованные антигенами трихинелл – 6 шт.;
-
стрипы, иммобилизованные антигенами токсокар – 6 шт.;
-
стрипы, иммобилизованные антигенами эхинококков – 6 шт.;
-
конъюгат, концентрат (антитела против IgG человека, меченные пероксидазой хрена) – 1 фл., 2,5 мл;
-
положительный контрольный образец, инактивированный (К+) – 1 фл., 2,5 мл;
-
отрицательный контрольный образец, инактивированный (К–) – 1 фл., 3 мл;
-
диагностический контрольный образец, инактивированный (Кд) – 1 фл., 3 мл;
-
концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т) – 2 фл. по 28 мл;
-
раствор для разведения сывороток, концентрат – 1 фл., 30 мл;
-
раствор для разведения ТМБ – 2 фл. по 13,0 мл;
-
тетраметилбензидин (ТМБ), концентрат – 2 фл. по 1 мл;
-
стоп-реагент – 2 фл. по 12 мл;
-
пленка для заклеивания стрипов – 4 шт.;
-
кювета – 1 шт.;
-
наконечники для пипеток – 8 шт.;
-
рамка для закрепления стрипов – 1шт.;
-
инструкция по применению – 1 шт.
3. Способ применения
Образцы сыворотки крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл отбирают из вены или из пальца натощак. Сыворотку тщательно отделяют от сгустка и примеси эритроцитов. Сыворотки хранят при температуре 2-8°С или замораживают при температуре минус 20°С, если они не могут быть исследованы в течение 48 ч. Не рекомендуется оттаивание и замораживание образцов более одного раза.
При анализе исследователь может использовать весь набор иммобилизованных на стрипах антигенов гельминтов либо отдельные антигены, в зависимости от поставленной задачи.
Следует обратить внимание на точное дозирование и тщательное перемешивание сывороток с раствором, используемым для их разведения. Для внесения компонентов в лунки планшетов используют пипеточные дозаторы с погрешностью измерения объёмов не более 5%, для промывания лунок планшета можно использовать ручные, автоматические промыватели, а также восьми- или двенадцатиканальные пипеточные дозаторы.
Все растворы используют подогретыми до температуры 18–25°С.
От соблюдения этих требований зависит точность и воспроизводимость результатов анализа.
Внимание! В комплект набора входит пленка для заклеивания стрипов при инкубации в термостате растворов сывороток и конъюгата. При использовании одного или нескольких стрипов следует отрезать полоску пленки нужного размера и клейкой стороной закрыть все лунки. При извлечении стрипов из термостата пленку удалить и поместить в дезинфицирующий раствор.
Пленка предназначена для одноразового использования.
3.1. Приготовление реагентов(для проведения анализа на 8 стрипах
3.1.1. Приготовление рабочего раствора ФСБ-Т
(Использовать для отмывки лунок стрпов и разведения конъюгата)
Рабочий раствор ФСБ-Т готовить из концентрата ФСБ-Т. Для этого 16 мл концентрата ФСБ-Т из флакона разводят до 400 мл дистиллированной водой (см. таблицу на стр. 8). При наличии в исходном концентрате осадка солей его необходимо подогреть при температуре (37±1)°C до полного растворения осадка.
Хранение: не более 48 ч при 2-8°С.
3.1.2. Приготовление раствора для разведения сывороток
Раствор для разведения сывороток готовят из концентрата раствора для разведения сывороток. Для этого к 10 мл концентрата добавить 30 мл рабочего раствора ФСБ-Т и тщательно перемешать.
Хранение: в течение недели при 2-8°С.
3.1.3. Приготовление рабочего раствора конъюгата
Готовить непосредственно перед использованием!
Для приготовления рабочего раствора конъюгата 0,8 мл концентрата конъюгата добавить к 8,0 мл рабочего раствора ФСБ-Т (см. таблицу на стр. 8).
Хранение: рабочий раствор конъюгата хранению не подлежит.
3.1.4. Приготовление раствора ТМБ
Готовить непосредственно перед использованием!
Для этого из флакона с концентратом ТМБ отобрать аликвоту 560 мкл и добавить к 8 мл раствора разведения для ТМБ (см. таблицу на стр. 8), прогретого до температуры 18-25°С, тщательно перемешать. При приготовлении раствора ТМБ следует исключить воздействие света (например, обернуть флакон фольгой).
Хранение: до 20 мин при температуре 18-25°С в темноте.
Внимание! В состав набора входят кювета и наконечники для пипетки, которые следует использовать только для работы с раствором ТМБ. Посуду и пипетки (наконечники), контактирующие с раствором ТМБ, нельзя отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к неконтролируемому разложению ТМБ в ходе реакции. После работы посуду и наконечники ополоснуть водой, промыть 70% этиловым спиртом и тщательно отмыть дистиллированной водой.
Количество одновременно используемых стрипов |
Рабочий раствор ФСБ-Т |
Раствор конъюгата |
Раствор ТМБ |
|||
Концентрат ФСБ-Т, мл |
Вода дистил., мл |
Концентрат конъюгата, мл |
Рабочий раствор ФСБ-Т, мл |
Концентрат ТМБ, мкл |
Раствор для разведения ТМБ, мл |
|
1 |
2,0 |
До 50 |
0,1 |
1,0 |
70 |
1,0 |
2 |
4,0 |
До 100 |
0,2 |
2,0 |
140 |
2,0 |
3 |
6,0 |
До 150 |
0,3 |
3,0 |
210 |
3,0 |
4 |
8,0 |
До 200 |
0,4 |
4,0 |
280 |
4,0 |
5 |
10,0 |
До 250 |
0,5 |
5,0 |
350 |
5,0 |
6 |
12,0 |
До 300 |
0,6 |
6,0 |
420 |
6,0 |
7 |
14,0 |
До 350 |
0,7 |
7,0 |
490 |
7,0 |
8 |
16,0 |
До 400 |
0,8 |
8,0 |
560 |
8,0 |
9 |
18,0 |
До 450 |
0,9 |
9,0 |
630 |
9,0 |
10 |
20,0 |
До 500 |
1,0 |
10,0 |
700 |
10,0 |
11 |
22,0 |
До 550 |
1,1 |
11,0 |
770 |
11,0 |
12 |
24,0 |
До 600 |
1,2 |
12,0 |
840 |
12,0 |