ГОУ ВПО
Кировская государственная медицинская академия Росздрава
Кафедра микробиологии
Методическая разработка для преподавателей
практического занятия по микробиологии у студентов Ш курса лечебного и педиатрического факультетов №11
Тема: «Риккетсии. Хламидии. Микоплазмы.»
Цель: Способствовать формированию знаний об основных свойствах риккетсий, хламидий, микоплазм, методах их диагностики.
Задачи:
Рассмотреть классификацию риккетсий, хламидий, микоплазм, их роль в патологии.
Обучить диагностике риккетсий, хламидий, микоплазм.
Изучить основные биологические свойства риккетсий, хламидий, микоплазм.
Студент должен знать:
1. До изучения темы: «Как культивируются облигатные внутриклеточные паразиты. Методы диагностики инфекционных заболеваний.»
2. После изучения темы: «Особенности строения, размножения, культивирования риккетсий, хламидий, микоплазм, а также заболевания, которые они вызывают и специфическую профилактику этих заболеваний.»
Студент должен уметь:
Проводить дифференциальную диагностику первичного сыпного тифа от болезни Брилля.
Контрольные вопросы:
Рассказать историю открытия риккетсий.
Рассказать классификацию риккетсий и вызываемых ими риккетсиозов.
Общая характеристика риккетсий, особенности их культивирования.
Эпидемиология и патогенез сыпного тифа.
Специфическая профилактика сыпного тифа.
Микробиологическая диагностика сыпного тифа.
Особенности жизненного цикла хламидий.
Особенности культивирования хламидий.
Методические указания:
А) План практического занятия (135 мин.):
1. Организационные вопросы – 2 минуты.
2. Теоретическая часть – 65 минут.
3. Практическая часть – 20 минут.
4. Изучение демонстрационного материала – 10 минут.
5. Оформление протокола – 10 минут.
6. Время на перерыв – 10 минут.
7. Задание на следующие занятие – 3 минуты.
8. Проверка протоколов и подведение итогов – 10 минут.
9. Уборка рабочего места – 5 минут.
Б) Содержание занятия:
1. Контроль исходного уровня знаний.
2. Ориентировочные основы самостоятельной работы студентов:
- выполнение практической работы;
- разбор демонстрационного материала: препаратов, реакций, таблиц;
- оформление и защита протокола по занятию.
В) Разделы:
1. Классификация риккетсий и риккетсиозов.
2. Таксономия, история открытия, общая характеристика риккетсий.
3. Биологические свойства риккетсий. Провачека.
4. Эпидемиология, патогенез сыпного тифа. Специфическая профилактика и специфическое лечение.
5. Микробиологическая диагностика сыпного тифа.
6. Таксономия, история открытия хламидий. Особенности жизненного цикла.
7. Биологические свойства хламидий.
8. Эпидемиология, патогенез заболеваний, вызываемые хламидиями. Специфическая профилактика.
9. Микробиологическая диагностика хламидиозов.
10. Таксономия, история открытия микоплазм. Биологические свойства.
11. Эпидемиология, патогенез вызываемых микоплазмами заболеваний.
12. Микробиологическая диагностика микоплазмозов.
Тезисы основного материала.
Риккетсиозы – это большая группа трансмиссивных острых лихорадочных инфекционных болезней, вызываемых риккетсиями, имеющих общность патогенеза и клинических проявлений болезни.
Термин «rickettsiа» впервые применил в 1916 г. основоположник учения о риккетсиях и риккетсиозах бразильский учёный да Роша – Лима. Он предложил назвать эту группу микроорганизмов в честь американского исследователя Р. Риккетса, открывшего в 1909 г. первого представителя этой группы микроорганизмов – возбудителя лихорадки Скалистых гор и погибшего в г. Мехико от сыпного тифа при его изучении в 1910 г.
В Советском Союзе учение о риккетсиях и риккетсиозах сформировалось в 40 – 50 – е годы XX века. Тогда образовалось несколько научных направлений в области изучения риккетсиозов: в Институте эпидемиологии и микробиологии им. Гамалеи, в Ленинградском институте им. Пастера, в Пермском институте вакцин и сывороток, в Львовском институте. Исследования, начатые в этих учреждениях, позволили П. Ф. Здродовскому в 1953 – 1954 гг. обобщить результаты работ и выделить риккетсологию в самостоятельный раздел медицины.
Таксономия :
Порядок: Rickettsiales
Семейство: Rickettsiaceae
Триба: 1. Rickettsieae
2. Erlichieae
Род: 1. Rickettsia
2. Coxiella
Род Rochalimea, входивший в эту трибу, в 1994 г. отнесён к бартонеллам.
• Род Rickettsia включает следующие виды патогенных риккетсий:
1. R. prowazekii (1916) – возбудитель эпидемического сыпного тифа и болезни Брилля;
2. R. mooseri (1931) – возбудитель эндемического сыпного тифа;
3. R. rickettsii (1922) – возбудитель пятнистой лихорадки Скалистых гор;
4. R. conorii (1932) – возбудитель марсельской лихорадки;
5. R. australis (1950) – возбудитель австралийского клещевого риккетсиоза;
6. R. sibirica (1948) – возбудитель северо–азиатского клещевого риккетсиоза;
7. R. acari (1946) – возбудитель везикулярного риккетсиоза;
8. R. tsutsugamushi (1931) – возбудитель лихорадки цуцугамуши;
9. R. japonica – возбудитель японской пятнистой лихорадки;
• Род Coxiella включает единственный вид – С. burnetii (1948)
– возбудитель лихорадки Ry.
• Род Rochalimea включает R. guintana (1961) – возбудитель волынской лихорадки.
Морфология :
Морфологически риккетсии являются полиморфными микроорганизмами, могут иметь палочковидную, кокковидную и нитеввидную форму. Полиморфизм (плеоморфизм) риккетсий зависит от фазы инфекционного процесса и его интенсивности. Неподвижны (за исключением R. conorii, R. sibirica) не образуют спор, имеют микрокапсулу. Грамотрицательные микроорганизмы. Плохо красятся обычными анилиновыми красителями, и поэтому для их окраски используют метод Романовокого – Гимзе. При этом кокковидные формы риккетсий окрашиваются в розово – красный цвет, а палочковидные окрашиваются с голубоватым оттенком.
Кроме того, для окраски микроорганизмов используется метод Гименеса и метод Маккиавелло, которые широко используются в зарубежной практике. По методу Маккиавелло в модификации П. Ф. Здродовского (используют фуксин Циля, так как в составе риккетсий много липидов) риккетсии окрашиваются - в ярко-розовый или рубиново-красный цвет, протоплазма клеток - в голубой, а ядра - в синий. И тогда их хорошо видно в световой микроскоп при увеличении в 1000 раз. Также можно использовать серебрение по Морозову. В этом случае риккетсии выглядят тёмно – коричневыми или угольно – чёрными на светло – коричневом фоне.
В настоящее время установлено, что риккетсии являются микроорганизмами, которые в эволюционно – биологическом аспекте занимают промежуточное положение между бактериями и вирусами.
Риккетсии имеют сходное с бактериями строение клетки. Высокое содержание у риккетсий липидов (46, 6 %) и низкое – углеводов (4,1 %) сближает их с вирусами, а по высокому содержанию нуклеиновых кислот
(до 12 %) риккетсии представляются как бактериоподобные микрооргани -змы, так как в их составе имеется и ДНК и РНК.
Что касается роста и размножения риккетсий, то в этом отношении они стоят ближе к вирусам, чем к бактериям; все они являются облигатными внутриклеточными и даже внутриядерными паразитами. Размножаются путём бинарного деления. Процесс размножения риккетсий происходит медленнее, чем бактерий: через 8 – 12 часов их количество удваивается.
Жизненный цикл :
Выявлены 2 формы риккетсий:
- вегетативные – размножающиеся и
- покоящиеся, обеспечивающие сохранность во внешней среде.
Культуральные свойства :
В искусственных условиях риккетсии, подобно вирусам, не могут выращиваться на обычных питательных средах. Поэтому их культивируют:
1. в желточном мешке куриного эмбриона (наиболее эффективен);
2. в организме лабораторных животных;
3. в организме переносчиков (вши, клещи);
4. в культуре тканей (менее удачная среда) мышиных и куриных фибробластов, клеток почек, трипсинизированных клеток нормальных и опухолевых тканей и др.
По типу дыхания риккетсии являются аэробами.
Антигенная структура :
Группоспецифические антигены риккетсии – ЛПС клеточной стенки, проявляющие свойства эндотоксинов. Антигены риккетсий имеют сходство с антигенами неподвижных штампов Proteus Vulgaris.
Риккетсии обладают гемолитическими свойствами, но только в отношении эритроцитов кролика и барана. Гемолиз эритроцитов человека они не вызывают.
Резистентность :
Риккетсии мало устойчивы к нагреванию, за исключением коксиелл Бернета. При температуре 50 – 56°C они погибают через 10 – 30 минут, при 80°C- через 1 минуту, кипячение убивает их мгновенно. Они инактивируются 0,5 % раствором формалина за 30 минут, 0,5 % раствором фенола – в течение нескольких часов. Они погибают под действием жирорастворителей (спирт, эфир, хлороформ). Но в высушенном состоянии и при низких температурах сохраняются длительное время. А температурный режим при – 25°, 27°C используется для сохранения жизнеспособности и консервации риккетсий. Все патогенные риккетсии чувствительны к антибиотикам, в особенности к группе тетрациклина.
Роль в патологии :
По этиологии, эпидемиологии, патогенезу и клинической картине выделяют 6 групп риккетсиозов:
I группа – сыпного тифа:
- эпидемический сыпной тиф;
- рецедивный (болезнь Брилля);
- эндемический (крысиный, блошиный / сыпной тиф;
П группа - клещевые и пятнистые лихорадки:
- марсельская;
- северо – азиатский риккетсиоз;
- везикулярный риккетсиоз;
Ш группа - параксизмальных риккетсиозов:
- волынская (пятидневная лихорадка);
IV группа - Ку – риккетсиозы (пневмо-риккетсиозы);
- Ку – лихорадка;
V группа - цуцугамуши:
- лихорадка цуцугамуши
VI группа - риккетсиозы Эрлихия
- лихорадка Эрлихия.
По эпидемиологии можно выделить 2 группы риккетсиозов.
1) Эпидемические антропонозы (эпидемический сыпной тиф и волынская лихорадка).
Источник инфекции – больной человек или носитель; переносчик – платяная или головная вошь.
Очаги волынской лихорадки были обнаружены А. В. Пшеничновым с сотрудниками на территории Кировской области среди переселенцев.
2) Эндемические зоонозы с природной очаговостью, когда резервуаром являются мелкие млекопитающиеся, а переносчиками – кровососущие членистоногие: клещи, блохи.
Риккетсии хорошо адаптированы к организму клещей, и паразитирование в них протекает бессимптомно с длительным носительством благодаря трансовариальной передаче инфекции.
На территории РФ регистрируются: эпидемический сыпной тиф и болезнь Брилля, эндемический сыпной тиф, лихорадка цуцугамуши, марсельская лихорадка, клещевой сыпной тиф Северной Азии и Ку-лихорадка.