- •Исследование микробов в окрашенном состоянии. Простые и сложные методы окраски. Подготовка мазка к окраске.
- •Окраска простыми красителями.
- •Окраска сложными красителями.
- •Окраска капсул по Бурри-Гинсу.
- •Окраска кислотоустойчивых бактерий по Циль-Нильсену.
- •Окраска спор по Ожешко.
- •Окраска включений волютина по Нейссеру.
Органелла |
Основные функции |
Особенности строения |
Клеточная стенка |
1.Постоянная форма клетки. 2.Защитная функция. 3.Регуляция роста и деления. 4.Коммуникация с внешней средой. 5.Рецепторная функция. 6.Антигенные свойства (О- и К-антигены). |
Состоит из двух слов – наружного (пластинча-того) и внутреннего (риги-дного). Основу клеточной стенки составляет пептидогликан. Пептидогликан имеет остов (аминосахара, свя-занные β-гликозидными связями), боковые (тетра-пептиды) и поперечные (9пентапептиды) цепочки. Пептидогликан может разрушаться под действие бета-лактамных антибиотиков. |
Цитоплазматическая мембрана |
1.Постоянная форма клетки. 2.Защитная функция. 3.Регуляция роста и деления. 4.Коммуникация с внешней средой. 5.Рецепторная функция. 6.Поддержание осмотического давления. 7.Активный транспорт веществ. 8.Участие в ком-партментализации 9.Синтез компонентов клеточной стенки. 10.Участие в образовании мезосом. |
Имеет типичное строение. |
Цитоплазма |
Генетический материал.
Синтез белка. Энергетический обмен. Питательные вещества, продукты обмена веществ. |
Сложная коллоидная сис-тема. Не содержит ЭПС, митохондрий. В центре располагается нуклео-плазма (бактериальная хромосома), не отграни-ченная от цитоплазмы мембраной. Содержит 70 S рибосомы, мезосомы, включения. |
Капсулы |
Внешний покров бактерий, моле-кулы, образующие капсулу, сильно гидратированы и препятствуют транспорту веществ. 1.Совместно с клеточной стенкой и ЦМ капсула защищает бактерий. 2.Запас питатель-ных веществ. 3.Антигенные свойства. 4.Фактор патогенности. 5.Задержка фагоцитарной активности макрофагов. |
Различают микрокапсулу, капсулу и слизистый слой. Патогенные микроорга-низмы могут образовы-вать капсулу лишь в организме, или как в организме, так и на питательной среде. |
Жгутики
|
Органелла движения плавающих бактерий. Жгутиковый аппарат способен менять направление движения на противоположное. Подвижность бактерий определяется либо микроскопически (фазово-контраст-ная микроскопия раздавленной кап-ли или световая микроскопия висячей капли), либо бактерио-логически (при посеве уколом в столбик подвиж-ные бактерии дают диффузный рост, а неподвиж-ные – растут по ходу укола). |
Длинные нитевидные образования, состоящие из сократительного белка флагеллина. Жгутик состоит из жгутиковой нити, крючка и базального тела (располагается в ЦМ). По характеру расположения жгутиков различают:
|
Донорные пили |
Орган конъюгации. |
У бактерий – носителей конъюгативных плазмид. |
Фимбрии (реснички) |
Прикрепление к субстратам. |
Короткие тонкие нити, окружающие бактериальную клетку. |
Споры |
Защитная функ-ция. Спорообразование начинается с кон-денсации нукле-оида. ЦМ начина-ет обрастать нук-леоид с цитоплаз-мой, образуется 2 слоя ЦМ. Между слоями ЦМ разви-вается кора (кортекс). Внутренний слой кортекса – заро-дышевая оболоч-ка, с неё прорас-тает вегетативная форма. |
Покоящиеся клетки с низ-ким уровнем метаболизма и высокой устойчивостью к внешним факторам. Клетки в спорах могут располагаться центрально (Bacillus anthracis), субтер-минально (Clostridium botulinum) и терминально (Clostridium tetani). |
Форма бактерий. Морфология, ультраструктура, химический состав.
Форма бактерий.
Всем бактериям присущи форма и размеры, которые варьируют в широких пределах от 0,1 до 15 мкм. Различают следующие основные формы бактерий:
Кокковидные.
Микрококки (располагаются поодиночке).
Диплококки (деление происходит в одной плоскости с образованием клеток, имеющих бобовидную или ланцетовидную форму).
Стрептококки (деление происходит в одной плоскости с образованием нитей).
Стафилококки (деление происходит в нескольких плоскостях с образованием скоплений, напоминающих гроздья винограда).
Тетракокки (деление происходит в двух взаимно перпендикулярных плоскостях с образованием тетрад).
Сарцины (деление происходит в трёх взаимно перпендикулярных плоскостях с образованием пакетов).
2. Палочковидные.
Собственно «бактерии» - споронеобразующие палочки.
Бациллы – спорообразующие аэробы.
Клостридии – спорообразующие анаэробы.
Палочки различаются по характеру концов (острые, закруглённые), по разложению (монобактерии, стрептобактерии), по толщине (тонкие, толстые).
3. Извитые.
Вибрионы (1 изгиб).
Спириллы (2-3 изгиба).
Спирохеты (спиралевидной формы подвижные бактерии, центральной структурой клетки является протоплазматический цилиндр, в котором содержится цитоплазма, нуклеоид, рибосомы и различные ферменты, протоплазматический цилиндр имеет постоянную форму и, благодаря пептидогликану, образует первичные завитки, вокруг протоплазматического цилиндра располагается периплазматический жгутик (жгутики), один конец которого прикреплён к одному из полюсов протоплазматического цилиндра, другой – к середине, периплазматические жгутики обвивают протоплазматический цилиндр, образуя осевую нить).
4. Нитевидные.
Образуют временные нити (при нарушении роста и деления палочек).
Образуют постоянные нити (серобактерии, железобактерии).
Морфология бактерий.
Клеточная стенка.
Цитоплазматическая мембрана.
Капсула.
Цитоплазма.
Нуклеоид.
Мезосома.
Включения.
Рибосома.
Жгутик.
Фимбрии (реснички).
Плазмида.
Строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Признак |
Грамположительные бактерии |
Грамотрицательные бактерии |
Слои клеточной стенки |
Пластинчатый слой тонкий, ковалентно связан с ригидным |
Слои хорошо выражены, лабильно связаны между собой. |
Пептидогликан |
5-6 слоёв (90% сухой массы) |
1-2 слоя (5-10% сухой массы) |
Тейхоевые кислоты |
Много, располагаются между ЦМ и ригидным слоем, выступают в качестве антигенов |
Нет |
Липиды |
Нет |
Много |
Липополисахарид |
Нет |
Состоит из липида А и полисахаридов. Определяет антигенные свойства, является важнейшим фактором патоген-ности (эндотоксин), активирует компле-мент |
L – трансформация бактерий.
L – трансформация бактерий – процесс перехода бактерий в другую форму. L – трансформация бактерий происходит как in vivo, так и in vitro под действием антибиотиков, некоторых ферментов, антител, угнетающих синтез клеточной стенки. L – формы бактерий характеризуются следующим:
Отсутствие клеточной стенки.
Нитевидные, волокнистые, шаровидные формы.
Анаэробы и микроаэрофилы.
Колонии двух типов: мелкие и типа «глазуньи» (плотные в центре, фестончатые по периферии).
Постепенный переход в грамотрицательные формы.
Изменение антигенных свойств (утрата О- и К-антигенов).
Утрата вирулентных свойств.
Способность длительно персистировать в организме.
Способность к восстановлению исходной структуры.
Исследование микробов в окрашенном состоянии. Простые и сложные методы окраски. Подготовка мазка к окраске.
Обезжиривание стёкол.
Нанесение материала на стекло.
Высушивание мазка (на воздухе или в пламени горелки).
Фиксация мазка (безводный метиловый спирт, 96% этиловый спирт, жидкость Никифорова (спирт:эфир = 1:1)).
Окраска простыми красителями.
Фиксированные мазки окрашивают кислыми, щелочными или нейтральными красителями. В качестве красителей используют основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет, везувин, фуксин Циля (основной фуксин – 1 г, этиловый спирт – 10 мл, фенол кристаллический – 5 г, глицерин – несколько капель, дистиллированная вода – 100 мл), метиленовый Пфлюгера (насыщенный метиленовый синий – 30 мл, 96% этиловый спирт – 100 мл, 1% NaOH – 1 мл, дистиллированая вода – 100 мл). После окрашивания мазки сушат фильтровальной бумагой.
Окраска сложными красителями.
В сложных методах окраски используют основной методы, диффузное вещество и дополнительный краситель.
Окраска по Граму.
Этап |
Вещество |
Время |
Окраска основным красителем |
Генцианвиолет |
1 минута |
Фиксация |
Раствор Люголя |
1 минута |
Обработка диффузным веществом |
96% этиловый спирт |
5-10 секунд |
Промывка |
Вода |
5-10 секунд |
Окраска дополнительным красителем |
Водный фуксин |
1 минута |
Промывка |
Вода |
5-10 секунд |
Принцип метода: Основной краситель связывается с пептидогликаном, которого много в клетке грамположительных бактерий. Раствор Люголя, содержащий йод, фиксирует комплекс. После обработки диффузным веществом и водой генцианвиолет, плохо связавшийся в стенке грамотрицательных бактерий, выходит, и они окрашиваются дополнительным красителем.
Окраска капсул по Бурри-Гинсу.
Этап |
Вещество |
Время |
Негативное контрастирование |
Чёрная тушь |
1 минута |
Фиксация |
Пламя горелки |
1 минута |
Окраска по Гинсу |
Водный фуксин |
1 минута |
Промывка |
Вода |
5-10 секунд |
Принцип метода: Тушь окрашивает капсулы, а краситель – цитоплазму.
Окраска кислотоустойчивых бактерий по Циль-Нильсену.
Этап |
Вещество |
Время |
Окраска основным красителем |
Карболовый фуксин Циля |
3-5 минут при нагревании |
Обработка диффузным веществом |
Раствор серной кислоты |
1-2 минуты |
Промывка |
Вода |
5-10 секунд |
Окраска дополнительным красителем |
Метиленовый синий |
3-5 минут |
Промывка |
Вода |
5-10 секунд |
Принцип метода: Основной краситель изначально окрашивает все микроорганизмы. После обработки кислотой краситель удерживают только кислотоустойчивые бактерии. Кислотонеустойчивые бактерии окрашиваются дополнительным красителем.