Глава 2. Устройство вэжх-системы Ultimate 3000
Жидкостной хроматограф - это прибор, который позволяет реализовать метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, один из самых универсальных и эффективных методов анализа в аналитической химии.
Поддон для элюентов.
Пластиковый поддон (корыто) предназначен для установки сверху на блок насоса, в этот поддон помещают бутили с растворителями (элюентами ). От бутылей идут шланги к насосу. Через эти шланги насос качает растворители через хроматограф. Поддон имеет углубление по краям корыта.
Насос.
Насос предназначен для обеспечения непрерывного потока элюента с постоянной скоростью через хроматографическую систему. Имеется встроенный дегазатор.
Детектор.
Детектор позволяет регистрировать вещества , поглощающие свет в ультрафиолетовом и видимом диапазоне спектра. Детектор состоит из источника света в виде двух лампы (одна для видимого, вторая для ультрафиолетового диапазона), монохроматора (устройство для выделения из сплошного широкополосного спектра пучка света определенной длины волны), проточной ячейки, через которую проходит элюент с образцом и фотоприемника, регистрирующего свет (информация взята из инструкций к прибору Ultimate 3000, Dionex).
Глава 3. Градуировка прибора
Градуировка для определения витамина В6
Условия проведения измерений
Колонка: Acclaim® C18, 3мкм, 120 Ǻ, 2,1×210 |
Время удерживания |
Элюент: ацетонитрил : вода 70%:30% (v/v) Скорость потока: 0,300 мл/мин Объем инъекции: 20 мкл Спектр поглощения: 261 нм |
Витамина В6: 1,37 – 1,40 мин Давление в колонке: в начале измерения: 124 бар в конце измерения: 121 бар |
Градуировочная шкала для определения витамина в6 в условиях проведения измерений
Стандартный образец: ГСО Витамин В6 (пиридоксина гидрохлорид), чистота 99%
Исходный раствор: 10,000 мг растворяют в 10 мл дистиллированной воды
Калибровочные растворы готовят путём разбавления исходного раствора 1:2 и 1:4
Таблица 1
Градуироваочная прямая для определения витамина в6
Концентрация, мг/мл |
Площадь пика, mAU*min |
Высота пика, mAU |
0 0,25 0,50 1,00 |
0 307,5916 588,33625 1124,301 |
888,511 1707,219 4806,199 |
Рис 1. Градуировочный график и уравнение регрессии для определения концентрации витамина В6 по площади хроматографического пика
Градуировка для определения витамина С
Условия измерения
Колонка: Acclaim® C18, 3мкм, 120 Ǻ, 2,1×210 |
Время удерживания |
Элюент: ацетонитрил : вода 70%:30% (v/v) Скорость потока: 0,400 мл/мин Объем инъекции: 20 мкл Спектр поглощения: 265 нм |
Витамина С: 0,37 – 0,40 мин Давление в колонке: в начале измерения: 158 бар в конце измерения: 159 бар |