Вопрос 5.

Методика обнаружения бактериофага в исследуемом материале:

Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жидкой питательной среде)

Готовят десятикратные разведения исследуемого бактериофага в питательном бульоне. Для этого в ряд пробирок разливают по 4,5 мл бульона. В 1 пробирку добавляют 0,5 исследуемого фага. Тщательно перемешивают и переносят в последующие пробирки (из пробирки в пробирку) по 0,5 мл соответствующего разведения фага с уменьшением его концентрации в десять раз. Получают разведения от 10"' до 10"⁹ степени. Затем в пробирки вносят по 1 капле суточной культуры соответствующих бактерий. После инкубации в течение суток определяют титр фага. За титр бфага принимают то его макс разведение, при котором наблюдается полный лизис культуры (просветление среды).

Метод титрования бфага по Грация (на плотной питательной среде) Питательный агар разливают в чашки Петри и подсушивают в термостате. Готовят полужидкий питательный агар по 3-4 мл в пробирке и растапливают его на водяной бане. Делают десятикратные разведения исследуемого бфага в изотоническом р-ре. Затем 0,5 мл каждого разведения бфага смешивают с таким же объемом суточной бульонной культуры чувствительных к бактериофагу бактерий и выливают эту смесь в пробирку с полужидким агаром t=45 С. Приготовленную смесь быстро выливают на поверхность первого слоя агара в чашке Петри, где она застывает в виде тонкого слоя. После застывания второго слоя агара чашки инкубируют при 37 С в течение суток. Смеси бфага, культуры и полужидкого агара делают из разведений фага 10²10^!и, в зависимости от предполагаемого титра фага. Не зараженные бфагом бактерии, размножаясь, образуют сплошной газон роста на поверхности агара. Каждая инфицированная бфагом бактерия лизируегся и освобождает потомство бфага, которое внедряется в интактные клетки бактерий, и весь цикл повторяется. В результате лизиса кл на сплошном бактериальном газоне появляютя «стерильные» пятна или негативные колонии бфага. Число этих пятен соответствует количеству фаговых частиц в засеянной смеси. Количество пятнообразующих единиц в 1 мл исходной суспензии бфага называется его титром.

Вопрос 6.

6.Описать принципы определения состава и количества микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека.

Мутуализм (лат. rautuus - взаимный) - взаимно полезное сожительство. Например, для человека полезными симбионтами являются молочнокислые бактерии - антагонисты гнилостной микрофлоры кишечника.

Комменсализм (фр. commensal - сотрапезник) - сожительство, односторонне полезное для одного из симбионтов, не причиняющее вреда другому. Например, комменсалом человека является непатогенная кишечная амеба, питающаяся остатками пищии не причиняющая человеку вреда. Эти две формы симбисва характерны для нормальной микрофлэры организма здорового человека. Для микроскопического исследования берут мазки из зева, мазки из зубного налета, ватным тампоном, смоченным в физ. растворе с запястья ладоней.

Микрофлора кожи. На поверхности кожи обитают, главным образом, транзиторные микробы: сарцины, стафилококки, коринебаюерии; в глубоких слоях кожи постоянным обитателем является эпидермальный стафилококк. Кожа, в особенности чистая, обладает бактерицидностью благодаря действию выделений потовых и сальных желез.

Полость рта наиболее богата по разнообразию видов бактерий, грибов, простейших, вирусов. Постоянные обитатели способны к адгезии - прикреплению к поверхности зубов или слизистой оболочки. Состав микрофлоры зависит от состояния организма, от состава пиши, от гигиены полости рта.

Микрофлора дыхательных путей. Микроорганизмы, содержащиеся во вдыхаемом воздухе, большей частью погибают в полости носа. Постоянными обитателями здесь являются микрококки, стафилококки, дифтеранды, нейссерии. Трахея и бронхи свободны от постоянной микрофлоры. Характеристмся микрофлоры оргатзма человека

Микрофлора организма человека является результатом взаимного приспособления в процессе взаимодействия микроорганизмов и хозяина. Все многообразие микробов, встречающихся в организме человека, можно условно разделить на три группы:

Транзиторюя микрофлора - микробы, случайно попавшие в организм, не имеющие приспособлений для выживания в км.

Резидентная микрофлора - микробы постоянно живущие, приспособившиеся к существованию в определенных областях органнзш, преимущественно полезные для него.

Условно-патогенные, способные вызвать заболевание при ослаблении сопротивляемости организма, при нарушении нормальной микрофлоры.

Организм ребенка при рождении свободен от микробов, но уже в процессе родов и в первые дни жизни микробы заселяют поверхность тела, ротовую полость, дыхательные пути, кишечник. В дальнейшем при взаимодействии микробов с организмом ребенка, в результате взаимной адаптации одни микробы будут удалены, другие приживутся. При этом для каждой области организма характерны определенные виды.

Свободны от микрофлоры кровь и внутренние органы, не сообщающиеся с внешней средой, такие как мозг, сердце, печень, селезенка и другие В норме не имеют резидентной микробной флоры такие органы, как матка, мэчевой пузырь, легкие.