Вопрос41.

Микроскопировать препарат с использованием иммерсионной системы светового микроскопа.

1. на приготовленный и окрашенный препарат нанести каплю иммерсионного масла и поместить на предметный столик.

2. повернуть револьвер до отметки объектива 90.

3. осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла.

4. установить ориентировочный фокус при помощи макровинта.

5. провести окончательную фокусировку препарата микровинтом, вращая его в пределах одного оборота.

6. по окончании работы вытереть масло с объектив и перевести револьверное устройство на малое увеличение (8)

Вопрос 42.

Приготовить фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасить его водным фуксином, микроскопировать и дать характеристику.

Приготовление мазка. На обезжиренное мылом предметное стекло помещают маленькую каплю водопроводной воды и переносят в нее петлей небольшое количество исследуемого материала. Полученную суспензию равномерно размазывают петлей на площади 1—2 см2

Высушивание мазка. Лучше сушить готовый препарат при комнатной температуре на воздухе или на руке. Тонкий мазок высыхает очень быстро. Можно слегка нагреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию проводить осторожно, не перегревая мазка, т.к. клетки микроорганизмов деформируются.

Фиксация-несколько целей: убить микроорганизмы, т. е. сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; обеспечить лучшее прилипание клеток к стеклу; сделать мазок более восприимчивым к окраске, так как мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые. Самым распространенным способом фиксации-термическая обработка (препарат трижды проводят через наиболее горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх). Не перегревать мазок, (грубые изменения клеточных структур, а иногда и внешнего вида клеток).

Окраска.

Фиксированный препарат помещают на параллельные стеклянные рейки, лежащие над кюветой, и заливают красителем на 1—3 мин. Следят за тем, чтобы во время окрашивания раствор красителя на мазке не подсыхал. В случае необходимости на мазок наливают новые порции красителя. По окончании окраски препарат промывают водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем препарат высушивают на воздухе или осторожно промокают фильтровальной бумагой, помещают на окрашенный мазок каплю иммерсионного масла и просматривают с объективом 90Х- Для получения более чистых препаратов краситель наливают на мазок, покрытый фильтровальной бумагой.

В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения светлое и чистое, окрашены только клетки микроорганизмов. Фиксировать и окрашивать можно также и препараты «отпечатки». Фиксированные, окрашенные препараты могут храниться длительное время.

Для определения формы клеток мелких палочковидных бактерий таких, как Serratia marcescens, готовят препарат фиксированных клеток и окрашивают их простым способом.

Вопрос43.

Приготовить фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасить его метиленовым синим, микроскопировать и дать характеристику.Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю физ. раствора, в которую петлей вносят исследуемый материал (его ерут из пробирки с чистой культурой, берут биолог, петлей, предварительно открывая пробирку с культурой в пламени горелки и закрывают ее в пламени горелки) и распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. При таком распределении материала в мазке при микроскопии можно увидеть изолированы бактериал>ные клетки. Если исследуемый материал содержится в жидкой среде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки, не давая капле закипать. Для фиксашн мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим - это простой (3-5 мин ), промыть водой, высушить и микроскопировать. Посмотреть в микроскоп и определить форму микроорганизмов (вопрос 52), в мазге окрасились микроорганизмы в синий шет.