Вопрос 1.

Указать принципы, на которых основывается выбор материала для исследований. Первый этап любого микробиологического исследования составляет правильный выбор материала для исследования.

Его определяют свойства возбудителя и патогенез вызываемого им заболевания. При поражениях отдельных органов и систем целесообразно отбирать материал соответствующей локализации.

При отсутствии поражений исследуют кровь, а затем отбирают образцы с учётом клинической картины заболевания и доступности материала для исследования.

Так, при лихорадке неясного генеза первоначально проводят посев крови; затем, при появлении симптомов более конкретных проявлений, например пневмонии, проводят забор мокроты.

Образцы следует забирать до назначения антимикробной терапии, с соблюдением правил асептики для предупреждения загрязнения материала. Каждый образец следует рассматривать как потенциально опасный. При заборе, транспортировке, хранении и работе с ним необходимо соблюдать правила биологической безопасности. Материал собирают в объёме достаточном для всего комплекса исследований. Микробиологические исследования следует начинать немедленно после поступления образца в лабораторию.

Выбор материала для исследования должен соответствовать характеру инфекционного процесса. Так, например, при установлении этиологии пневмонии материалом должна быть мокрота, а не слюна, а при раневых инфекциях, отделяемое следует забирать из глубины раны, а не с её поверхности.

Вопрос 2

Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний проводится по следующим направлениям:

1. обнаружение возбудителя заболевания в патологическом материале

2. обнаружение специфических антител в сыворотке крови больного (серологическая диагностика)

3. выявление у больного повышенной чувствительности к возбудителю с помощью аллергических проб .

Обнаружение и идентификацию возбудителя заболевания проводят используя микроскопический, микробиологический и биологический методы. Микроскопический метод используется для обнаружения возбудителя непосредственно в патологическом материале. Может применяться как самостоятельный метод в отношении некоторых микроорганизмов с характерной морфологией. С помощью микроскопического метода можно сделать заключение при обнаружении гонококков в гное, менингококков в спинномозговой жидкости, палочек туберкулеза, а также простейших: плазмодиев малярии, лейшмании, дизентерийной амебы. Микроскопия применятся как обязательный этап исследования при микробиологическом методе.

Микробиологический метод применяется для выделения чистой культуры микробов и их идентификации по ряду признаков:морфологии, способности окрашиваться красителями, характер роста на пит средах, биохимическим свойствам и по антигенной структуре. Для эпидемиологического анализа проводят внутривидовую идентификацию - определение серовара, фаговара, биовара.

Для экспресс- диагностики применяют РИФ со специфическими сыворотками. Метод позволяет выделить возбудителя в течении несколько часов. В последнее время для идентификации микробов применяю методы основанные на исследовании состава ДНК (ПЦР)

Биологический метод основан на способности некоторых бактерий быстро размножаться в организме чувствительных к ним лабораторных животных. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных. После появления у зараженных организмов признаков болезни их убивают. Органы исследуют гистологически, микроскопически для обнаружения в них возбудителя.

. Способность бактерий дифтерии продуцировать токсин устанавливают в реакции преципитации в агаре.Для этого в чашку Петри с питательным агаром, содержащим 15- 20% лошадиной сыворотки, 0.3% мальтозы и 0.3% цистина кладут полоску фильтровальной бумаги,пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 5000 АЕ/мл, Чашку подсушивают при 37 градусах в течение 30 мин и засевают исследуемые культуры в виде перпендикулярных к бумаге штрихов на расстоянии 0.6-0.8 см от края бумаги.В качестве контроля используют заведомо токсигенную культуру.Посевы инкубируют при 37 градусах до следующего дня.При размножении токсигенной культуры в месте соединения токсина с антитоксинов плотной питательной среде образуется преципитат в виде белых линий-«усов».В случае выделения нетоксигенной культуры ставят дополнительные пробы на цистиназу, уреазу и реакцию агглютинации с агглютинирующей дифтерийной сывороткой.

Серологические методы направлены для выявления специфических антител в сыворотке крови пациента. С целью выявления динамики нарастания титра антител исследуют парные сыворотки, полученные от пациента в начале болезни и через 1-3 недели.

Аллергический метод. Применяется для выявления повышенной чувствительности к возбудителю путем постановки внутрикожных проб с аллергеном