- •4 Очистка белков от низкомолекулярных примесей методом диализа.
- •Работа 4. Очистка от низкомолекулярных примесей методом гельфильтрации на сефадексе (молселекте).
- •5 Количественное определение белка сыворотки крови биуретовым методом.
- •6. Высаливание белков сыворотки крови сернокислым аммонием.
- •Работа 3. Осаждение белков солями тяжелых металлов.
- •Осаждение белков медным купоросом.
- •Осаждение белков уксуснокислым свинцом.
- •Работа 4. Осаждение белков органическими кислотами.
- •Работа 5. Осаждение белков концентрированной азотной кислотой (проба Геллера).
- •9 Качественная реакция на крахмал
- •Реакция Фелинга
- •Работа 3. Термолабильность ферментов.
- •Порядок выполнения работы
- •. Количественное определение аскорбиновой кислоты в лекарственных растениях по Тильмансу.
- •Работа 9. Определение рибофлавина в поливитаминных препаратах.
- •. Патологические компоненты мочи.
- •1. Качественное определение белка.
- •2. Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.
- •3. Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».
- •4. Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.
- •5. Качественное определение кетоновых тел.
- •6. Качественная реакция на кровяные пигменты.
- •7. Качественное определение желчных пигментов.
- •8. Проба Петенкофера на желчные кислоты.
- •9. Проба Яффе - реакция на уробилин.
4. Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.
При наличии в моче белка открытого качественными реакциями, его количество определяют методом Робертса-Стольникова. Принцип и ход работы описаны в модуле 1 «Руководства» (занятие 2).
5. Качественное определение кетоновых тел.
В нормальной моче кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и -гидроксимасляная кислоты) содержатся в небольших количествах (0,02-0,05 г/сут или 20-50 мг) и обычными качественными реакциями не обнаруживаются. Повышенная экскреция их с мочой (кетонурия) наблюдается при сахарном диабете (до 10-50 г/сут), голодании, инфекционных заболеваниях (туберкулезе и др.)
Проба с нитропруссидом натрия (Легаля) на ацетон.
При взаимодействии ацетона с нитропруссидом натрия в щелочной среде образуется оранжево-красное окрашивание. После подкисления концентрированной уксусной кислотой оранжево-красное окрашивание переходит в вишневое.
В пробирку налить 1 мл мочи и добавить 2-3 капли свежеприготовленного раствора нитропруссида натрия и 3-4 капли 10 % раствора едкого натра. После развития оранжево-красной окраски прилить несколько капель концентрированной СНзСООН и отметить изменение цвета раствора в вишневый.
Проба Либина на ацетон.
Проба основана на образовании йодоформа СНIз при взаимодействии ацетона с I2 в щелочной среде.
К 1 мл мочи добавить 3-4 капли 10% раствора КОН и по каплям раствора йода в йодистом калии (раствор Люголя) до появления мути (слабо-желтый кристаллический осадок йодоформа) при наличии ацетона, обладающего специфическим «больничным» запахом.
СНз-С-СН3 + 2I2 + 4NаОН — СН3I + CH3COONa + 3NaI + 3Н2О
О
К 1 мл мочи добавить 4-5 капель 5% раствора FеСl3. Наблюдается вишнево-красное окрашивание за счет комплексного соединения железа с енольной формой ацетоуксусной кислоты, постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты:
СНз-С-СН2СООН — СН3-С-СН3 + СО2
О О
6. Качественная реакция на кровяные пигменты.
Появление в моче форменных элементов крови (гематурия) или кровяных пигментов (гемоглобинурия) относится к патологии и может быть обнаружено с помощью ряда проб (гваяковой, бензидиновой и др.). Гематурия имеет место при нарушении целостности кровеносных сосудов, повреждении мочеполовых путей (мочевые камни, рак мочевого пузыря); гемоглобинурия наблюдается при отравлении гемолитическими ядами, при ожогах происходит разрушение эритроцитов. Кровяные пигменты можно открыть бензидиновой пробой, которая основана на окислении бензидина атомарным кислородом, который образуется при разложении перекиси водорода кровяным пигментом, моча окрашивается в синий или зеленый цвет.
Проба с бензидином.
В пробирку наливают 1 мл прокипяченной мочи, добавляют 4 капли раствора 5% бензидина в ледяной уксусной кислоте (свежеприготовленный) и 4 капли 3% раствора перекиси водорода. После перемешивания жидкость окрашивается в синий или зеленый цвет, это указывает на присутствие крови в моче.
Проба гваяковой смолой.
Налить в пробирку 1 мл исследуемой мочи. В другую пробирку добавить 1 мл 2% раствора гваяковой смолы, туда же добавить 3-5 капель 1% раствора перекиси водорода и осторожно наслоить в пробирку раствор, содержащий мочу. При наличии кровяных пигментов отметить появление синего кольца на границе наслаивания.