
- •4 Очистка белков от низкомолекулярных примесей методом диализа.
- •Работа 4. Очистка от низкомолекулярных примесей методом гельфильтрации на сефадексе (молселекте).
- •5 Количественное определение белка сыворотки крови биуретовым методом.
- •6. Высаливание белков сыворотки крови сернокислым аммонием.
- •Работа 3. Осаждение белков солями тяжелых металлов.
- •Осаждение белков медным купоросом.
- •Осаждение белков уксуснокислым свинцом.
- •Работа 4. Осаждение белков органическими кислотами.
- •Работа 5. Осаждение белков концентрированной азотной кислотой (проба Геллера).
- •9 Качественная реакция на крахмал
- •Реакция Фелинга
- •Работа 3. Термолабильность ферментов.
- •Порядок выполнения работы
- •. Количественное определение аскорбиновой кислоты в лекарственных растениях по Тильмансу.
- •Работа 9. Определение рибофлавина в поливитаминных препаратах.
- •. Патологические компоненты мочи.
- •1. Качественное определение белка.
- •2. Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.
- •3. Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».
- •4. Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.
- •5. Качественное определение кетоновых тел.
- •6. Качественная реакция на кровяные пигменты.
- •7. Качественное определение желчных пигментов.
- •8. Проба Петенкофера на желчные кислоты.
- •9. Проба Яффе - реакция на уробилин.
. Патологические компоненты мочи.
1. Качественное определение белка.
Белок мочи состоит из сывороточного альбумина и глобулина. Кроме того, на белок дает реакцию моча, содержащая кровь и гной. Белок в моче обнаруживается с помощью реакций осаждения.
В нормальной моче содержится незначительное количество белка (0,05-0,15 г/сут), что не обнаруживается обычными качественными пробами. Белок в моче обнаруживается при нефрозе, нефрите, сердечной декомпенсации и при некоторых других патологиях. Пробы на белок мочи основаны на его денатурации различными агентами.
Проба кипячением.
2-3 мл мочи (профильтрованной, если она щелочная, то ее подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции) доводят до кипения и добавляют 2-3 капли уксусной кислоты. Появление осадка, не растворяющегося при прибавлении кислоты, указывает на присутствие в исследуемой моче белка. Осадки фосфатов и карбонатов кальция и магния растворяются в более кислом растворе.
Проба Геллера.
К 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно, держа пробирку наклонно, наслаивают 1 мл профильтрованной мочи (лучше наслаивать мочу пипеткой). На границе двух слоев при наличии белка появляется белое кольцо.
Проба с сульфосалициловой кислотой.
К 1 мл профильтрованной мочи приливают 3-4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты. Появление осадка или мути указывает на присутствие белка.
Примечание! Избыток сульфосалициловой кислоты может привести к растворению.
2. Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.
В норме в моче содержится 0,2-0,4 г/л глюкозы и она не обнаруживается обычными реакциями. При диабете и некоторых других заболеваниях, а также после обильного приема с пищей углеводов, эмоционального стресса, при отравлениях эфиром, оксидом, хлороформом, поражения почек он в значительных количествах появляется в моче.
В пробирку налить 1-2 мл мочи, добавить равный объем реактива Фелинга и осторожно нагреть верхний слой жидкости. При наличии сахара отметить выпадение кирпично-красного осадка.
3. Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».
«Глюкотест» приготавливается путем пропитки полосок фильтровальной бумаги 0,5x5см смесью, содержащей глюкозооксидазу, пероксидазу и краситель. При смачивании бумаги раствором, содержащим глюкозу, происходит окисление глюкозы под действием фермента глюкозооксидазы. Образующаяся при этом перекись водорода разлагается ферментом пероксидазой с окислением содержащего в тесте красителя. Интенсивность изменения окраски в определенной степени пропорциональна содержанию глюкозы в растворе, поэтому «Глюкотест» используется и для полуколичественного определения содержания глюкозы в моче (от 1,0 до 2,0 г/л и выше).
Бумажку «Глюкотеста» погрузить в исследуемую мочу так, чтобы нанесенная на бумажку желтая полоса была смочена. Немедленно извлечь бумажку, положить смоченным концом на пластмассовую пластинку и через 2 мин сравнить изменившуюся окраску цветной полосы со шкалой, имеющейся в комплекте. Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски.