. Количественное определение аскорбиновой кислоты в лекарственных растениях по Тильмансу.

Метод основан на способности аскорбиновой кислоты восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол, который в кислой среде имеет красную окраску, а при восстановлении обесцвечивается; в щелочной среде окраска синяя. Реакцию проводят в кислой среде для предотвращения разрушения витамина С.

Химизм реакции:

Техника выполнения работы. На аптечных весах берут навески лекарственного сырья по 0,5 г (шиповник, очищенный от семян – 0,2 г). Исследуемый материал растирают в ступке с 5 мл 2% раство­ра НС1. Вытяжку фильтруют через тонкий слой ваты в мерную колбу на 100 мл. Извлечение витамина С из той же навески повторяют 3 раза с 5 мл соляной кислоты, фильтруя каждый раз полученную вытяжку в ту же мерную колбу. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой. Для титрования отбирают 10 мл вытяжки в стаканчик и титруют 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола до розо­вой окраски, сохраняющейся в течение 30 сек.

Содержание витамина С в растительном сырье (кг) производят по формуле:

0,088 А1001000 Х= , где

10В

X – содержание аскорбиновой кислоты в мг/кг;

0,088- масса аскорбиновой кислоты, соответствующая 1 мл 0,001н раствора 2,6-ДХФИФ, мг;

А - результат титрования 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолом, мл;

В - навеска исследуемого материала, г;

100- разведение взятой пробы;

1000 – коэффициент пересчета на 1 кг сырья;

10 – объем жидкости, взятый на титрование, мл.

Результаты исследования оформить в виде таблицы и сделать вывод о значении исследованного растительного материала как источника витамина С. В выводе указать, целесообразно ли применение данного лекарственного растения с целью профилактики С-витаминной недостаточности.

. Качественная реакция на витамин А с хлорным железом.

В сухую пробирку налить 1-2 капли рыбьего жира, 10-15 капель хлороформа. Перемешать и добавить 5 капель 1% раствора хлорного железа. Отметить появление ярко-зеленого окрашивания.

Работа 2. Качественные реакции на витамин Д.

2.1. Анилиновая проба на витамин Д.

В сухую пробирку налить 5 капель рыбьего жира, 15 капель хлороформа и 5 капель анилинового реактива (15 частей анилина и 1 часть концентрированной соляной кислоты). Осторожно нагреть на спиртовке и отметить появление красного окрашивания.

2.2. Реакция с серной кислотой.

В пробу налить 1 каплю масляного раствора витамина Д, 4 капли хлороформа, перемешать и добавить 2 капли концентрированной серной кислоты. Встряхнуть и отметить появление ярко-желтого окрашивания, переходящего в буро-красное.

Работа 3. Качественная реакция на витамин Е с азотной кислотой.

В сухую пробирку налить 5 капель 1% раствора токоферола, прибавить 10 капель концентрированной азотной кислоты и встряхнуть. После отстаивания эмульсии отметить появление красного окрашивания в верхнем слое.

Работа 4. Качественная реакция на викасол с щелочным раствором

цистеина

Викасол – синтетический аналог витамина К₁ - в присутствии цистеина в щелочной среде окрашивается в лимонно-желтый цвет.

Техника выполнения работы. На сухое часовое стекло наносят 5 капель раствора викасола, добавляют 5 капель раствора цистеина и 1 каплю 10% раствора едкого натра. Появляется лимонно-желтое окрашивание.

Работа 5. Качественные реакции на витамин PP.

5.1. Реакция с гидросульфитом натрия.

В пробирку на кончике скальпеля поместить порошок витамина РР, прилить 0,5-1,0 мл 10% раствора бикарбоната натрия и 0,5-1,0 мл свежеприготовленного 5% раствора гидросульфита натрия. Отметить появление продукта восстановления витамина РР желтого цвета.

5.2. Реакция с раствором уксусно-кислой меди.

К 1 мл 0,1% раствора никотиновой кислоты добавить 1 мл 10% раствора бикарбоната натрия, прилить равный объем 5% раствора уксусно-кислой меди.

никотиновая кислота

Отметить появление голубого окрашивания и выпадения осадка медной соли синего цвета, образующегося по следующей реакции

медная соль никотиновой кислоты синего цвета

. Определение тиамина в поливитаминных препаратах.

Принцип метода основан на способности тиамина окисляться феррицианидом калия в щелочной среде в тиохром, который после экстракции из раствора бутиловым спиртом дает в ультрафиолетовых лучах сине-голубое окрашивание.

Ход работы. Драже из поливитаминов размять в ступке, добавить 30 мл 0,1н раствор НСl и тщательно размешать. В 3 пробирки добавить:

1. Контроль - 5 мл 0,1 н р-р НСl.

2. Опыт - 1 мл р-ра витаминов + 4 мл дистиллированной воды.

3. Стандарт - 5 мл стандартного р-ра тиамина.

Во все пробирки прилить по 1,5 мл окислительной смеси, осторожно встряхнуть до полного перемешивания, во все пробирки налить по 5 мл н-бутанола, интенсивно встряхивать в течение 5 минут. Подождать расслаивания жидкости. Все пробирки помещают в штатив флуороскопа и сравнивают флуоресценцию р-ра в 3-х пробирках.