Работа 3. Осаждение белков солями тяжелых металлов.

Осаждение белков солями тяжелых металлов происходит при небольших концентрациях этих солей. Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (свинца, меди, серебра, ртути и др.) адсорбируют их, образуя с ними солеобразные и комплексные соединения, растворимые в избытке солей. Способность белка прочно связывать ионы тяжелого металла, в виде нерастворимых осадков в воде, позволяет использовать их как противоядие при отравлении солями ртути, меди, свинца и т.д.

Осаждение белков медным купоросом.

Налить в пробирку 1 мл раствора белка и по каплям добавить 10% раствор CuSO₄ до образования осадка, нерастворимого в воде. При добавлении 10% раствора CuSO₄ в большом объеме наблюдают растворение осадка в избытке реактива. Растворение осадка в избытке солей называется адсорбционной пептизацией. Данное явление происходит вследствие возникновения одноименного положительного заряда на частицах белка.

Осаждение белков уксуснокислым свинцом.

К 1,0 мл раствора белка добавить 2-5 капель 5% раствора уксуснокислого свинца до образования осадка.

По выполненной работе сделать вывод.

Работа 4. Осаждение белков органическими кислотами.

Некоторые органические кислоты вызывают необратимые осаждение белков. Практическое применение получили трихлоруксусная (CCl₃COOH) и сульфосалициловая кислоты. Сульфосалициловой кислотой пользуются в клинике при обнаружении малых количеств белка в биологических жидкостях, а трихлоруксусной кислотой в целях получения безбелкового фильтрата для определения низкомолекулярных азотистых соединений (пептидов, аминокислот, мочевины, нуклеотидов и др.).

Ход работы. К 0,5-1,0 мл раствора белка добавить равный объем 10% раствора сульфасалицилловой кислоты или 5% раствора трихлоруксусной кислоты. Отметить выпадение белого осадка.

Работа 5. Осаждение белков концентрированной азотной кислотой (проба Геллера).

Выпадение белка в осадок при действии некоторых минеральных кислот связано с дегидратацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами.

В избытке всех минеральных кислот, за исключением азотной, выпавший осадок белка растворяется. Поэтому реакция осаждения белков азотной кислотой распространена при клинических исследованиях мочи ( проба Геллера).

Ход работы. К 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки, наклонив ее под углом 45⁰ так, чтобы обе жидкости сразу не смешивались, наслоить равный объем раствора белка.

На границе двух жидкостей образуется осадок в виде белого кольца.

По работе сделать вывод.

7 Проба кипячением.

2-3 мл мочи (профильтрованной, если она щелочная, то ее подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции) доводят до кипения и добавляют 2-3 капли уксусной кислоты. Появление осадка, не растворяющегося при прибавлении кислоты, указывает на присутствие в исследуемой моче белка. Осадки фосфатов и карбонатов кальция и магния растворяются в более кислом растворе.

Проба Геллера.

К 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно, держа пробирку наклонно, наслаивают 1 мл профильтрованной мочи (лучше наслаивать мочу пипеткой). На границе двух слоев при наличии белка появляется белое кольцо.

Проба с сульфосалициловой кислотой.

К 1 мл профильтрованной мочи приливают 3-4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты. Появление осадка или мути указывает на присутствие белка.