Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
951913 (1).doc
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.03.2025
Размер:
1.03 Mб
Скачать

15.Методы цитологии. Микроскопирование.

Микроскопия в клеточных исследованиях представлена двумя основными методами: исследования в светлом поле с использованием классических гистологических красителей и анализ флуоресцентно-меченных клеток с возможностью рассмотрения и получения изображений микроэлементов вещества в зависимости от разрешающей способности приборов (микроскопов).

16. Разрешающая способность микроскопа.

Микроскоп-оптический прибор для получения увеличенных изображений, а также измерения объектов или деталей структуры невидимых или плохо видимых невооруженным взглядом.

Разрешающая способность-минимальное расстояние между 2мя точками на плоскости, которое можно различить с помощью микроскопа или любого другого оптического прибора. (чем меньше расстояние, тем больше разрешающая способность). На разрешающую способность влияет: свет, условия, оптическая система.РС=0,61*λ / NA. Где NA = числовая апертура характеризующая светособирательную способность. λ-длина волны света (550нм)

Числовая апертура: NA=n*sin ½ α. n=показатель преломления среды между фронтальной линзой, объективом и покровным стеклом.α-апертурный угол.

Апертурный угол-угол между крайними лучами конического светового потока, проходящего через оптическую систему микроскопа.

Разрешающая способность :PC=0,61*λ / n*sin1/2 α. числовое значение апертуры объективов всегда выгравировано на их оправах и указывается в справочиках.

17.Световая микроскопия.

В световой микроскопии лучи света от микрообъекта, проходя через систему собирательных линз — объектив и окуляр,- дают в соответствии с законами оптики увеличенное изображение изучаемого образца. Благодаря многообразию оптических эффектов комплекс микроскопических методов позволяет наглядно выявить наличие различных компонентов в микропробе и их пространственное распределение, а также измерить оптические константы отдельных составляющих, по которым их можно идентифицировать. 

18.Метод «замораживания-скалывания» и «замораживания-травления».

Метод электронной микроскопии «замораживание-скалывание» - дает возможность изучать внутреннее строение клеточных мембран. Клетки замораживают при температуре жидкого азота в присутствии антифриза во избежание искажений за счет образования кристаллов льда. Замороженный блок затем раскалывают лезвием ножа. Скол часто проходит через гидрофобную середину двойного слоя липидов, обнажая внутреннюю поверхность клеточных мембран. Образующуюся поверхность скола оттеняют платиной, органический материал удаляют и изучают полученные реплики в электронном микроскопе. Такие реплики усеяны небольшими выпячиваниями - внутримембранными частицами, которые представляют собой крупные мембранные белки. Метод электронной микроскопии - метод «замораживания-травления» - используется для изучения внешней поверхности клеток и мембран. В данном случае клетки замораживают при очень низкой температуре и замороженный блок раскалывают лезвием ножа. Содержание льда вокруг клеток понижают возгонкой воды в вакууме при повышении температуры. Участки клетки, подвергнутые такому травлению, затем оттеняют для приготовления платиновой реплики. Метод «замораживания – травления» не позволяет использовать антифризы, поскольку они не летучи и по мере возгонки воды остаются в образце. Чтобы добиться высокого качества изображения, необходимо препятствовать образованию больших кристаллов льда. Это возможно при ускоренном замораживании образца.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]