Реакция сперматозоидов на hos-тест
Несмотря на слабую подвижность сперматозоидов, необходимо тщательно "надсекать" хвосты перед инъекцией. Показано, что такое "агрессивное обращение" по отношению к тестикулярным сперматозоидам повышает вероятность оплодотворения и частоту наступления беременности в циклах TESE-ICSI (Palermo et al. 1999).
Если в тестикулярной суспензии не обнаружены сперматозоиды, можно сделать попытку ИКСИ с использованием элонгированных или округлых сперматид. Элонгированные сперматиды с легкостью идентифицируются: они напоминают сперматозоиды без хвоста и несут цитоплазматическую каплю. Идентификация округлых сперматид затруднена, в настоящее время опубликовано лишь несколько сообщений о беременности и родах после ИКСИ с использованием округлых сперматид.
Лазерный тест на витальность сперматозоидов (a неживой, b и c живой)
Проблема работы с элонгированными сперматидами, равно как и с неподвижными сперматозоидами, заключается в том что, ооциты с большой долей вероятности не будут активированы после инъекции. Возможно осуществить попытку вспомогательной активации ооцита кальциевым ионофором, для этого сразу после ИКСИ ооциты помещают на 15-20 мин в среду, содержащую кальциевый ионофор (5-20мкМ), а затем тщательно отмывают в 5 каплях культуральной среды, далее культивируют стандартным образом.
Повторное замораживание
В нескольких случаях, когда единичную порцию замороженной тестикулярной ткани предавали для ИКСИ из другой клиники, мы, размораживая биоптат, часть использовали для ИКСИ, а часть повторно замораживали для следующих попыток. В клинике ЭКО Боннского университета получено 2 беременности после ИКСИ дважды криоконсервированноыми тестикулярными сперматозоидами. Хотя этот метод не может быть рекомендован как стандартная процедура, следует отметить принципиальную возможность повторного замораживания тестикулярных образцов.
Формирование пронуклеусов
У некоторых пациентов после TESE-ICSI формирование пронуклеусов занимает больше времени, чем обычно. Это может быть связано, с незрелостью тестикулярных сперматозоидов. И хотя в таких случаях мы осуществляем перенос эмбрионов, вероятность наступления беременности невысока.
Приложение
На прилагаемом компактном диске вы найдет несколько мультимедиа файлов: английский вариант данного конспекта, цитируемые статьи, видеоролики. Для инструкции откройте файл "read me first.doc"
Список литературы
Список процитированной литературы Вы найдете в заключительной части английской версии Руководства (стр. 14).
Оборудование и материалы
для работы с тестикулярной тканью
1 инвертированный микроскоп с микроманипуляторами для ИКСИ, объективы 20x или 40x (фазовый контраст или контраст Хофманна)
1 микроскоп прямого света, объектив 40x, фазовый контраст
1 термостолик (37°C)
Центрифуга под пробирки 10 – 15 мл
Центрифуга под пробирки 1,5 – 2 мл (или соответствующий адаптер для центрифуги из предыдущего пункта)
Предметные стекла (упакованные по два в фольгу и стерилизованные нагреванием)
Покровные стекла
Шприцы 5мл
Иглы для шприца (20G x 1½, 0.9 x 40 mm and 20G x 2¾, 0.9 x 70 mm)
Чашки Петри d=10-15мм
Скальпели №11, №22
Культуральная среда с буферной системой HEPES (37°C)
Пробирки для центрифугирования 10-15мл
Пробирки для центрифугирования 1,5-2мл (типа «Eppendorf»)
Крио-пробирки (Nunc)
Маркер для надписи
Среда для криоконсервации на основе глицерина (10 – 20 ml)
Микропестик для пробирок Eppendorf (номер по каталогу 0030 120.973)
Пипетки для работы с малыми объемами (10 – 200 мкл)
Наконечники для пипеток для работы с малыми объемами
Аппаратура и принадлежности для криоконсервации