Хирургическое извлечение и подготовка тестикулярной ткани для икси и криоконсервации

Тестикулярной биопсии предшествует тщательное и всестороннее андрологическое обследование пациента. Пациенты, направляемые на TESE, должны быть информированы, что частота анеуплоидии у эмбрионов, полученных после ИКСИ с использованием тестикулярных сперматозоидов, достоверно выше. (Bernardini et al., 2000; Silber et al., 2003) Пациенты так же должны быть осведомлены, что в случаях мужского бесплодия, вызванного делецией Y-хромосомы, мальчик, полученный путем TESE-ICSI, унаследует этот дефект, и будет бесплодным, как и отец (Silber & Repping, 2002).

Если сделано заключение об азооспермии, необходимо подтвердить диагноз как минимум двумя дополнительными анализами, проведенными в иных условиях, чтобы исключить возможную ошибку. При подозрении на азооспермию крайне важно помимо стандартного анализа эякулята изучить содержимое осадка после переосаждения эякулята с отмыванием осадка культуральными средами (Ron-El et al., 1997). Во время переосаждения следует "отмывать" весь эякулят. Не следует использовать переосаждение в градиенте плотности, (например, в перколле) так как при этом значительная часть сперматозоидов теряется. Полезно приготовить чашку по меньшей мере с 3-4 каплями культуральной среды (50-100 мкм каждая), покрытыми минеральным маслом. В каждую каплю добавляют 5-10 мкм ресуспендированного осадка эякулята и помещают в инкубатор на 30 минут. После выдерживания в инкубаторе чашечка с осадком исследуется под инвертированным микроскопом на предмет наличия сперматозоидов. Необходимо осмотреть края капель при увеличении 20х. Если сперматозоиды на крае капли не обнаружены, необходимо осмотреть всю каплю: возможно, в центре содержатся неподвижные сперматозоиды. Если подобным образом сперматозоиды не будут обнаружены в двух эякулятах, можно сделать заключение об азооспермии.

Чашка для микроскопического исследования осадка эякулята у пациентов с подозрением на азооспермию

капля среды с буферной системой HEPES объемом 50-100мкл под минеральным маслом

Если у пациента с азооспермией есть признаки генитального воспаления (например, повышено количество лейкоцитов в эякуляте), необходимо провести противовоспалительную и противомикробную терапию с использованием Диклофенака и Доксициклина и повторить анализ эякулята через 3-4 недели после лечения. После такого лечения в эякуляте в некоторых случаях может быть обнаружено небольшое количество сперматозоидов (Montag et al., 1999; полный текст - на CD).

После того как азооспермия диагностирована необходимо установить ее форму: является ли она обструктивной или необструктивной. Это важно для планирования лечения, так как у пациентов с обструктивной азооспермией сперматогенез обычно сохранен, и сперматозоиды содержатся в эпидидимисе или в семеннике. При уверенности получить сперматозоиды при эпидидимальной или тестикулярной биопсии удобно проводить операцию у мужчин в один день с овариальной пункцией супруги. Однако, если уверенности в получении сперматозоидов нет (как это часто бывает при необструктивной форме азооспермии), удобным проводить тестикулярную биопсию до начала стимуляции суперовуляции супруги. Если же сперматозоиды будут обнаружены в материале биопсии, их можно криоконсервировать и в дальнейшем использовать в программе ВРТ. Если же сперматозоиды обнаружить не удастся, может быть рекомендовано использование спермы донора. Такая схема работы позволяет предотвратить дорогостоящую и ненужную стимуляцию женщины.