Определение количества сперматозоидов в 1 мл и во всем эякуляте

Подсчет обездвиженных сперматозоидов осуществляется в каме­ре Горяева.

Реактивы для обездвиживания сперматозоидов.

1. 1,0 мл 40% нейтрального формалина и 100 мл дистиллиро­ванной воды.

2. 1,0 мл формалина, 5,0 г бикарбоната натрия, вода до 100 мл.

3. Жидкость Рубенкова: 0,1 г основного фуксина, 0,02 мл краски Романовского, 0,2 мл концентрированной карболовой кис­лоты, 0,1 мл глицерина, 2 мл 96° этанола, 100 мл 9 г/л хлорида натрия. Эта жидкость окрашивает сперматозоиды, что позволяет наряду с подсчетом общего количества сперматозоидов изучить их морфологию.

Эякулят после перемешивания разводят в 20 раз раствором для обездвиживания сперматозоидов в пробирке. Сперму на­бирают в пипетку от гемометра Сали до метки и вводят в 0,4 мл разводящей жидкости. Тщательно перемешивают и заполняют заранее подготовленную счетную камеру Горяева так же, как для подсчета форменных элементов крови. Через несколько минут производят подсчет сперматозоидов в пяти больших разграфлен­ных квадратах, расположенных по диагонали при увеличении: окуляр 7, объектив 40 с опущенным конденсором. Подсчитыва­ют только те сперматозоиды, головки которых лежат внутри квадратов. Полученное число умножают на 10⁶, в результате по­лучают количество сперматозоидов в 1 мл эякулята, а затем ум­ножают на объем эякулята и получают общее количество спер­матозоидов. В норме в 1 мл спермы содержится 60—120 х 10^б сперматозоидов, во всем эякуляте количество сперматозоидов превышает 120 х 10⁶, в среднем 150—450 х 10⁶.

Определение числа неподвижных сперматозоидов в счетной камере

Сперма разводится теплым изотоническим раствором хлори­да натрия в 20 раз. Заполняют камеру Горяева и подсчитывают количество неподвижных сперматозоидов так же, как описано выше. Расчет процентного содержания неподвижных спермато­зоидов производят следующим образом, исходя из пропорции: „ а х 100

X = _______ ,где а — количество неподвижных сперматозоидов,

б

б — общее количество сперматозоидов. Результат выражают в процентах.

Пример. Содержание сперматозоидов в 1 мл равно 80 х 10⁶, из них неподвижных 16 х 10⁶. Отсюда количество неподвижных , 16x100

форм X = _______ =20%

У здоровых людей неподвижные спер- 80

матозоиды составляют 10—20%.

Кинезисграмма — это процентное соотношение сперматозои­дов с различной подвижностью. Количество подвижных сперма­тозоидов является главным критерием при оценке их полноцен­ности. Активноподвижные сперматозоиды обладают быстрым поступательным целесообразным вращательным движением с перемещением в поле зрения. Малоподвижные сперматозоиды дви­гаются медленно, совершая колебательное, манежное движение или подергивание на месте. Исследование проводят с использо­ванием «окошечка Фонио» для ограничения поля зрения. Иссле­дование проводят при температуре 20—25 °С. На сухое предмет­ное стекло наносят каплю перемешанного эякулята, покрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха. Под­считывают в нескольких полях зрения не менее 100 клеток, от­мечая количество активноподвижных, малоподвижных и непо­движных. Рассчитывают процентное соотношение сперматозои­дов с различной подвижностью.

Для общей визуальной оценки можно использовать шкалу в баллах: 4 — активная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной подвижностью со значительной скоростью), 3 — хо­рошая подвижность (большинство сперматозоидов обладает пря­молинейной подвижностью, но она несколько снижена), 2 — посред­ственная подвижность (небольшое количество двигается поступатель­но), 1 — плохая подвижность (поступательное движение сперматозо­идов отсутствует), 0 — полное отсутствие движения сперматозоидов. Определение мертвых и живых сперматозоидов: окрашивание по Блуму. На предметное стекло наносят каплю спермы, рядом две капли водного раствора кислого (50 г/л) эозина, капли смешивают, через несколько секунд добавляют каплю водного рас­твора нигрозина (100 г/л), перемешивают и через несколько се­кунд делают тонкий мазок при помощи шлифованного стекла. Мазок высушивают и исследуют с помощью иммерсионного объ­ектива. Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя отдельно живые и мертвые сперматозоиды. Мертвые сперматозоиды окрашены в красно-фиолетовый цвет, живые — бесцветные. Можно окрашивать одним эозином без нигрозина, однако при окраске с нигрозином сперматозоиды выглядят более контрастно. В нормальном эякуля­те живые сперматозоиды составляют 90—95% от общего количества.