Лекция №33 Нормальная микробная флора влагалища: виды, морфология, причины ее изменения. Бактериальный вагиноз: лабораторная диагностика.

Гонорея

Гонорея Neisseria gonorrhoeae — инфекционное заболевание с преимущественным поражением слизистых оболочек мочеполовых органов. Наиболее часто гонококки поражают органы, выстланные цилиндрическим эпителием (уретра, цервикальный канал, конъюнктива глаза и др.). Гонококки, попадая на цилиндрический эпителий, быстро про­никают в подслизистую ткань и вызывают воспалительную реак­цию. При длительном течении воспалительный инфильтрат по­степенно замещается соединительной тканью. В дальнейшем, при отсутствии лечения, возможно рубцевание с последующим нарушением функции органов (рубцовые сужения уретры и др.). Без лечения гонорея переходит за внутренний зев, при этом поражаются эндометрий, придатки матки.

Наиболее распространенным, но менее чувствительным ме­тодом лабораторной диагностики гонореи является бактериоскопическое исследование, особенно при хронической торпидно протекающей гонорее. Однако при правильном заборе материа­ла, квалифицированном изучении препаратов, использовании провокации возможно успешное выявление гонококков.

При подозрении на гонококковую инфекцию у мужчин ис­следуют отделяемое мочеиспускательного канала, которое берут до мочеиспускания, парауретральных ходов, промывные воды прямой кишки, секрет предстательной железы, мазки из рото­глотки (по показаниям).

У женщин материал берут из уретры, цервикального канала, после протирания его ватным тампоном, парауретральных ходов, бартолиниевых желез, прямой кишки, по показаниям из ротоглотки. Лабораторная диагностика гонореи ротоглотки возможна лишь при посеве и выделении чистой культуры на питательных средах.

Из каждого очага берут по 2 препарата: один окрашивают 10 г/л водным раствором метиленового синего для ориентировочной микроскопии; другой препарат окрашивают по Граму.

Обнаружение гонококков в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим

Реактивы.

1. Водный раствор метиленового синего (10 г/л): 1 г метиле­нового синего растворяют в 100 мл дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр.

2. 96° этиловый спирт.

Ход определения. Материал наносят на стекло равномерным слоем и высушивают на воздухе. Препарат фиксируют 3 мин в 96° этиловом спирте, высушивают, затем наносят на него раствор метиленового синего на 1 мин, тщательно смывают оставшийся краситель под струей холодной воды, высушивают в штативе.

Микроскопическое исследование проводят под микроскопом с естественным или искусственным освещением: объектив 90 им­мерсионный, окуляр 7 или 10. Ядра клеток окрашены в синий цвет, цитоплазма — в голубой цвет разной интенсивности, до бес­цветной. Бактериальная флора окрашивается в синий цвет разной интенсивности. Диплококки (гонококки) темно-синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, сложены попарно вогнутыми сто­ронами друг к другу; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках.

Обнаружение гонококков в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грама

­ Принцип. Метод основан на свойстве гонококков и других грамотрицательных микроорганизмов при обесцвечивании их в этиловом спирте отдавать основной фиолетовый краситель и до­крашиваться в дальнейшем дополнительным оранжево-красным.

Реактивы.

1. Водный раствор кристаллвиолета (10 г/л): 1 г кристалл - виолета растворяют в 100 мл кипящей дистиллированной воды, раствор фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр.

2. Водный раствор Люголя: 2 г йодида калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды, в полученном растворе рас­творяют 1 г чистого йода, фильтруют через бумажный фильтр.

3. 96° этиловый спирт.

4. Водный раствор нейтрального красного (10 г/л): 1 г ней­трального красного растворяют в 100 мл дистиллированной воды и фильтруют через бумажный фильтр.

Ход определения. Препарат покрывают полоской фильтро­вальной бумаги и заливают водным раствором кристаллвиолета на 1 мин. Следят, чтобы между фильтровальной бумагой и стек­лом не было пузырьков воздуха, их удаляют, придавливая полос­ку бумаги стеклянной палочкой или пипеткой. Через 1 мин бу­магу снимают, препарат промывают водопроводной водой и заливают раствором Люголя, который выдерживают в течение нескольких секунд до почернения мазка. Затем остаток раствора Люголя смывают и приступают к обесцвечиванию препарата в 96° этиловом спирте. Обесцвечивание проводят под визуаль­ным контролем, поочередно погружая и вынимая препарат из спирта, находящегося в стаканчике. Обесцвечивают препарат до тех пор, пока фиолетовые струйки красителя, стекающие с его тонких участков, не станут бледно-серого цвета. Препарат быст­ро промывают под струей водопроводной воды, а затем докра­шивают в течение 3 мин водным раствором нейтрального крас­ного. Препарат тщательно промывают, пока струя воды, стекаю­щая с него, не станет прозрачной, высушивают.

При правильной окраске препарат оранжево-красного цвета на тонких участках, лилово-фиолетового на толстых. Ядра кле­точных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) должны частично удерживать основную фиолетовую окраску, т. е. в цен­тре они должны быть окрашены в фиолетовый цвет, по перифе­рии в оранжево-красный, а гонококки, расположенные в лейко­цитах и на эпителиальных клетках, будут оранжево-красные. Хо­рошее качество окраски обеспечивается своевременным прек­ращением обесцвечивания препарата.

При недообесцвечивании, когда ядра клеток интенсивно окрашены в фиолетовый цвет, гонококки могут сохранять фио­летовую окраску. В переобесцвеченных препаратах стафилококки и стрептококки могут быть окрашены в оранжево-красный цвет и приняты за гонококки.

При бактериоскопическом исследовании идентификация го­нококков производится на основании их морфологии, располо­жения и отношения к окраске по способу Грама. Гонококк — это парный кокк, по форме имею- щий сходство с кофейными зернами, сложенными вогнутыми сторонами друг к другу. Длина его 1,8 мкм, ширина 0,7—0,8 мкм, между половинками диплококка имеется щель, равная половине одного кокка. Размножаясь делением в разных плоскостях, гоно­кокки не образуют цепочки. При нахождении гонококка внутри лейкоцита характерно их расположение парами или группами под углом друг к другу. Часто гонококки лежат на клетках плос­кого эпителия рядами, располагаясь перпендикулярно друг другу внутри ряда. Частота внутри- и внеклеточного расположения го­нококков зависит от периода заболевания, активности фагоцито­за, от методики взятия материала. При идентификации гонокок­ка необходимо учитывать все три его основных признака. Поло­жительный ответ нужно давать при обнаружении только типич­ных форм гонококков. Следует учитывать, что при приеме анти­биотиков и сульфаниламидов гонококки могут становиться грамположительными, приобретать округлую или неправильную форму, неравномерную величину.

При хронически текущей, леченной гонорее, при подтвер­ждении гонорейного процесса у детей и женщин в менопаузе, при установлении излеченности гонореи используется культуральный метод диагностики.