- •Теоретические основы современных методов микроскопии, используемых в биологии
- •Содержание
- •Раздел 1. Оптическая микроскопия
- •Тема 1.1 Микроскопия проходящего света и стереоскопическая микроскопия
- •Вопросы для повторения
- •Тема 1.2 Изготовление препаратов для световой микроскопии
- •Вопросы для повторения
- •Тема 1.3 Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия
- •Вопросы для повторения
- •Тема 1.4 Основные методы, используемые в конфокальной лазерной сканирующей микроскопии
- •Вопросы для повторения
- •Приложение 1. Исследования морфофункциональных особенностей биологических объектов при помощи конфокальной лазерной сканирующей микроскопии
- •Резюме по теме
- •Раздел 2 электронная микроскопия
- •Тема 2.1 Просвечивающая электронная микроскопия
- •Вопросы для повторения
- •Тема 2.2 Подготовка образцов для просвечивающей электронной микроскопии
- •Вопросы для повторения
- •Тема 2.3 Растровая (сканирующая) электронная микроскопия (рэм)
- •Вопросы для повторения
- •Тема 2.4 Подготовка образцов для растровой (сканирующей) электронной микроскопии
- •Вопросы для повторения
- •Приложение 2. Исследования морфофункциональных особенностей биологических объектов при помощи электронной микроскопии
- •Резюме по теме
- •Раздел 3 аналитическая электронная микроскопия
- •Тема 3.1 Спектральный рентгеновский микроанализ
- •Вопросы для повторения
- •Тема 3.2 Подготовка образцов для спектрального рентгеновского микроанализа
- •Вопросы для повторения
- •Приложение 3. Исследование морфофункциональных особенностей биологических объектов при помощи рентгеновского микроанализа
- •Резюме по теме
- •Раздел 4 сканирующая зондовая микроскопия
- •Тема 4.1 Атомно-силовая микроскопия
- •Вопросы для повторения
- •Тема 4.2 Методы сканирующей зондовой микроскопии
- •1. Контактные методики.
- •Вопросы для повторения
- •Тема 4.3 Факторы, влияющие на сзм - изображение
- •Вопросы для повторения
- •Приложение 4. Исследования морфофункциональных особенностей биологических объектов при помощи сканирующей зондовой микроскопии
- •Резюме по теме
- •Литература
- •Практический блок (семинарский)
- •Содержание занятий №1, №2, №3, №4
- •Содержание занятий №5, №6
- •Содержание занятия №7
- •Содержание занятия №8, №9
- •Практикум (семинарский)
- •Тематика рефератов (докладов, сообщений)
Практический блок (семинарский)
Цель практикума
Основной целью является формирование у магистрантов системы знаний по теоретическим основам современных методов микроскопии и перспективах их использования для изучения живых микросистем.
Задачи практикума
формирование знаний по основам устройства и принципа работы современных электронных, сканирующих зондовых и оптических микроскопов;
изучение результатов новейших исследований в биологии, выполненных на основе методов зондовой и конфокальной микроскопии;
выбор адекватных методов для выполнения диссертационных работ.
Содержание занятий №1, №2, №3, №4
Оптическая микроскопия. Оптическая микроскопия как метод изучения биологических объектов. Принципы формирования изображения в современных оптических микроскопах. Типы и виды оптических микроскопов.
Микроскопы проходящего света. Конструктивные части микроскопа проходящего света. Модели современных микроскопов проходящего света. Основные методы исследования, используемые для изучения биологических объектов (светлое поле, темное поле и фазовый контраст, дифференциальный интерференционный контраст, поляризационный контраст, флуоресценция).
Стереоскопические микроскопы. Основные оптические характеристики. Принципы формирования изображения. Применение для изучения биологических объектов.
Изготовление препаратов для световой микроскопии. Подготовка материала для временных и постоянных препаратов. Фиксация, основные фиксаторы. Окрашивание, характеристика наиболее распространенных красителей. Приготовление микротомных препаратов.
Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (КЛСМ). Общая характеристика принципов конфокальной микроскопии. Системы сканирования в конфокальной лазерной микроскопии. Получение трехмерного изображения в конфокальной микроскопии. Основные методы, используемые в КЛСМ: иммуноцитохимия, трассирование, формирование изображения, флуоресцентные белки, передача энергии посредством флуоресцентного резонанса, восстановление флуоресценции после фотовыжигания, Визуализация времени жизни во флуоресцирующем состоянии, флуоресцентная корреляционная спектроскопия, флуоресцентная in situ гибридизации.
Содержание занятий №5, №6
Электронная микроскопия. Теоретические основы электронной микроскопии. Основные классы электронных микроскопов (просвечивающие и сканирующие) и принципы их работы.
Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ). Устройство просвечивающих электронных микроскопов: источники электронов, электронные линзы, вакуумная система, держатель образцов. Подготовка препаратов для ПЭМ ( фиксация, заливка, ультрамикротомия, монтаж срезов, фотографирование изображений). Устройство ультрамикротомов.
Растровая (сканирующая) электронная микроскопия (РЭМ). Принципы работы РЭМ. Методы получения увеличенного изображения. Этапы подготовки биологических объектов к РЭМ (первичная обработка, фиксация и обезвоживание, высушивание, напыление).
Содержание занятия №7
Аналитическая электронная микроскопия. Приставки рентгеновского спектрального анализа, используемые для изучения локализации и количественной оценки элементов в клетке и субклеточных структурах. Физические основы работы спектрометров. Преимущества рентгеновского микроанализа по сравнению с другими методами. Подготовка образцов для рентгеновского микроанализа.