80. Методы м/б диагн-ки вирусн забол-й. Методы выдел-я и идентиф-и вирусов. Серологич р-и.

Вирусы размнож-ся только в жив клетках. Культив-е вируса происходит на уровне орг-ма подопытного жив-го и на уровне культуры клеток (вне орг-ма). Вирусы имеют тканевую и типовую специф-ть. Поэтому при выдел-и неизвестного вируса одномоментно заражают 3-4 культуры клеток. Чаще используют эмбрион ткани (кур/эмбрион). Вирусы оспы хорошо размнож-ся в хорион-аллантоисной оболочке, паротита – в амнионе, гриппа – в амнионе и аллантоисе, бешенства – в желточном мешке. Берут 12-дневн эмбрионы.

При невозмож-ти выделить и идентиф-ть вирус стандартными методами (на культуре клеток, кур/эмбрионах) инфекц материал вводят лаборат жив-м (мыши, кролики, обезьяны), после развития инфекц процесса проводят повторное зараж-е чувствит клеточных культур. Методы типирования вирусов:

• микроскопич – вирусоскопия, обнаруж-е внутриклет включ-й;

• иммуновирусологич – метод иммунной электронной микроскопии, иммунофлюоресценции, гемагглютинации, гемадсорбции.

Идентиф-я вирусов – иммуновирусологич методы, включают - РТГА, задержки гемадсорбции, РСК, РН, преципитации в геле агара.

Серологич р-и:

1. РН – основана на подавл-и цитопатогенного эффекта после смешив-я вируса со специфичными АТ. Неизвест вирус смеш-ют с известной антисыв-кой и вносят в монослой клеток. Если клетки погибли, то вирус соответ-ет антисыв-ке.

2. РТГА – прим-ют для идентиф-и вирусов, способных агглютинировать эритроциты.

3. Прямая иммунофлюоресценция – метод быстрый. Заражённые клетки светятся.

4. Иммуноэлектронная микроскопия – сложный и дорогой метод. Определяют разл виды вирусов.

Выявл-е противовирусных АТ в сыв-ке: РТГА, РСК, РИФ, ИФМ.

Выявл-е вирусных Аг: ИФМ, гибридизация ДНК, ПЦР (полимеразно-цепная р-я).

81. Особ-ти противовирусного иммунитета. Роль фагоцитоза и гумор факторов. Интерфероны, св-ва, класс-я. Особ-ти д-я интерферонов на вирусы.

Осн мех-мы защиты направлены на огран-е и подавл-е вир/репродукции в клетках (при антибактер иммунитете – разруш-е возбуд-ля). Неспецифич факторы противовир иммунитета:

1. клет ареактивность – нет клеток, способных поддерживать репродукцию вирусов;

2. термолаб вируснейтрализующие β-ингибиторы – ЛП сыв-ки крови, способные связывать вирус. Комплекс непрочный, распад-ся через 2 часа под д-ем трипсина, но сопровожд-ся необратимой инактивацией вируса;

3. t° тела – при ↑ t° - задержка и подавл-е репродукции вируса;

4. фагоцитир-е - вирусы слабо фагоцитир-ся и не разруш-ся ферментами. Но макрофаги фагоцитируют клетки, поражённые вирусом;

5. интерференция вирусов – 1 вирус подавляет репродукцию другого в клетке-хозяине. Но не всегда!

6. интерферон – ингибитор репродукции вирусов. Это гликопротеин: α, β, γ, I типа и II типа. Нарушает трансляцию вирусной РНК рибосомами клетки-хозяина и прекращает синтез белка.

Специфич факторы: АТ – представлены Ig. Т-клетки лизируют клетки-мишени, инфициров вирусами; распознают чужерод вирусный Аг в комплексе с молекулой МНС I на мембране клетки-мишени. Цитотоксич эффект Т-киллеров регулир-ся белками–перфоринами (наруш-е осмотич баланса с внеклет средой приводит к гибели клетки). Т-хелперы – распознают Аг в комплексе с молекулой МНС II; стимулируют дифференц-ку В-клеток и Т-киллеров; активируют макрофаги.

Мех-м противовир д-я интерферона: интерферон индуц-ет «антивирус состояние» клетки – резистент-ть к проникн-ю или блокада репродукции вирусов. Блокада обусловлена угнет-ем трансляции вирусной м-РНК. Интерфероны не обладают вирусспецифичностью (широк спектр антивирус активности). Интерфероны препятствуют репродукции вирусов за счёт активации клет/ферментов – протеинкиназ. Интерферон-I подавляет синтез вир/белков. Интерферон-II ингибирует размнож-е вирусов, активирует Т-клетки, моноциты, макрофаги, блокирует «раздевание» вирусов.