7. Спец методы микроскопии: люминесц, фазовоконтраст, темнопольная. Электронн микроск-я.

Фазовоконтр микроскопия - позволяет изучать живые и неокраш объекты. Метод связан с измен-ем условий освещ-я при наблюд-и слабоконтраст биол/объектов в неокраш/состоянии. Метод тёмного поля выявляет контуры объекта, метод фазового контраста позволяет увидеть элементы внутр/стр-ры прозрач/объекта. Фазово-контрастное устройство даёт возмож-ть преобраз-ть фазовые измен-я светов/волн, проходящих через объект, в амплитудные. В рез-те прозрач/микробы становятся видимыми. Различают: (+) фазовый контраст (изображ-е темнее фона) и (-) фазовый контраст (изображ-е светлее фона). Отличит особ-ть в изображ-и – эффект «гало» по контуру объекта (небольшое просветлённое поле вокруг объекта).

Темнопольная микроск-я (1903 г) - позволяет наблюдать живые бактерии. Основана на эффекте, кот-й достиг-ся освещ-ем объекта полым конусом света. Выявл-ся контуры объекта. При отсут-и объекта поле зрения тёмное, при наличии объекта – яркое блестящее свечение контура вокруг объекта на тёмном фоне.

Люминесц микроск-я – основана на способ-ти некот-х в-в светиться при возд-и коротковолн излучения. Флуоресцир объекты поглощают свет 1-й длины волны и излучают в др области спектра (цвет меняется). В микроскопе свет от источника проходит через 2 фильтра. Синий фильтр пропускает свет, возбуждающий флуоресценцию образца. Желтый фильтр задерживает синий свет, но пропускает желтый, красный, зеленый свет, излучаемый флуоресцирующим объектом и воспринимаемый глазом. Обычно исследуемые микробы окрашивают непосредственно с помощью АТ или флуорохромов.

8. Строение бактер/клетки. Ф-и клет/стенки. Стр-ра клет/стенки грам (-) бактерий. Пептидогликан, лпс, липопротеин, внешняя мембрана, структура, ф-и.

Поверхн стр-ры бактерий: капсулы, жгутики, ворсинки, клет/стенка, под ней – цитоплазматич мембрана. Внутр стр-ры: цитоплазма, в ней - органеллы: нуклеоид, рибосомы и мезосомы (мембранные образ-я), включения и споры (у спорообразующих). Клет/стенка – состоит из пептидогликана. Нет клет/стенки у микоплазм и L-форм бактерий. Хим/состав клет/стенки и её строение хар-ны для определ групп прокариотов и служат их отличием. По отношению к окраске по Граму бактерии делятся на грам(+) и грам(-).

Пептидогликан (муреин) – основа клет/стенки. Состоит из параллельных полисахар/цепей (череда звеньев N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой к-ты). С каждым остатком N-ацетилмурамовой к-ты связан тетрапептид (из аминок-т). Наличие определ аминок-т в пептидогликане учитыв-ся в таксономии бактерий. У грам(-) - пептиды в пептидогликане перекрёстно связаны друг с другом. У грам(+) – пептиды связаны через пептидный мостик.

У грам(+) – пептидогликан многослойный, связан с тейхоевыми к-тами. У грам(-) - 1-слойный. Использ-ся при окраске по Граму.

У грам(-) поверх пептидогликана есть наруж/мембрана (как мозаика), состоит: фосфолипиды, ЛП, белки, ЛПС (липополисахарид). С пептидогликаном ковалентно связан ЛП (глобулярный слой). Поверх него мембраноподобная стр-ра из фосфолипидов, ЛПС и белков. Снаружи слой из своб/липопротеида. Всю толщу наруж/мембраны пронизывают белки, образующие выводные каналы. Это - белки-порины, обеспеч-ют диффузию разных соедин-й, явл-ся рецепторами для фагов. Ф-и: пептидогликан придаёт стенке ригидность и эластичность, с ним связаны Аг у грам(+) бактерий. У грам(-) в пептидогликан входит ЛПС (имеет Аг- и токсич св-ва – эндотоксин).

Ф-и клет/стенки: 1) защитная, придает форму, поддерживает постоянство внутр/среды, участвует в делении. 2) транспорт питат в-в и выдел-е метаболитов. 3) Аг св-ва. 4) способ-ть окраш-ся. 5) наруш-е синтеза компонентов стенки приводит к гибели бактерии или образ-ю L-форм.

Отличия клет/стенки: у грам(+) нет ароматич и серосодерж аминок-т, мало липидов, у грам(-) – наоборот. У грам(+) есть магниевая соль РНК, у грам(-) – нет. Эта соль образует прочный хим/комплекс с белком, йодом и генцианвиолетом, кот-й не разруш-ся спиртом. У грам(-) такого комплекса нет, они легко обесцвеч-ся под д-ем спирта. Споры по Граму не окраш-ся, окраска появл-ся только после использ-я концентр теплой краски. Причём при последующей обработке к-той спора не обесцвеч-ся.

9. L-формы бактерий, особ-ти, роль. Факторы образ-я L-форм. Микоплазмы, забол-я.

L-формы – это бактерии, полностью (частично) лишённые клет/стенки либо утратившие способ-ть синтез-ть её и сохранившие способ-ть к размнож-ю. Меняется морф-я клетки, наруш-ся её деление. L-формы разных бактерий неразличимы; содержат крупные или мелкие сферич тела, включения в виде вакуолей, элементарны тельца или гранулы; образ-ся при примен-и препаратов, кот-е ингибируют или разрушают пептидогликан клет/стенки (соответственно пенициллина и лизоцима).

Различают нестабильные L-формы (сохраняют некот-е элементы клет/стенки и могут возвращаться в исходный вид) и стабильные (не способны к реверсии).

Микоплазмы – мелкие прокариоты, лишенные истинной клет/стенки и не способные синтезир-ть её компоненты. Ф-и клет/стенки выполняет 3-слойная ЦПМ. Полиморфны. Образуют псевдомицелий. Размнож-ся бинарным делением, способны к почкованию и сегментации. Осн компонент клет/стенки – холестерин, микоплазмы сами его не образуют, утилизируют из тканей или питат сред. Грам (-). На плот средах колонии похожи на «яичницу-глазунью». На кровяных средах – гемолиз. В полужид средах растут по линии укола. В жид/средах – помутнение. Забол-я: инфекции верхних дых/путей, пневмонии, урогенит микоплазмоз, микоплазменные артриты.