10. Культивирование вирусов в курином эмбрионе. Методы заражения. Индикация и идентификация вирусов.

Для вирусологических исследований используют куриные эмбрионы 7  12-дневного возраста. Перед заражением определяют жизнеспособность эмбриона путем овоскопирования. Живые эмбрионы при овоскопировании проявляют двигательную активность, хорошо виден сосудистый рисунок. Простым карандашом очерчивают границы воздушной камеры. Куриные эмбрионы заражают вируссодержащим материалом в асептических условиях, стерильными инструментами, предварительно обработав скорлупу над воздушным пространством йодом и спиртом.

Методы заражения куриных эмбрионов могут быть различны: нанесение материала на хорион-аллантоисную оболочку, введение в амниотическую и аллантоисную полости или в желточный мешок. Выбор метода заражения зависит от биологических свойств вируса.

Индикация вируса в курином эмбрионе производится по гибели эмбриона, положительной реакции гемагглютинации на стекле с аллантоисной или амниотической жидкостью, по образованию фокусных поражений («бляшек») на хорион-аллантоисной оболочке.

11. Выделение вирусов на лабораторных животных. Способы заражения животных, индикация и идентификация вирусов.

Лабораторные животные используются для выделения вирусов из инфекционного материала, когда невозможно применить более удобные системы (культуры клеток или куриные эмбрионы). Используют преимущественно новорожденных белых мышей, хомяков, морских свинок, крысят. Заражают животных в соответствии с цитотропизмом вируса: пневмотропные вирусы вводятся интраназально, нейротропные — интрацеребрально, дерматотропные — на кожу.

Индикация вируса основана на проявлении у животных признаков инфекционного заболевания, их гибели, характере патоморфологических и патогистологических изменений в тканях и органах, а также по положительной реакции гемагглютинации.

12. Серологические реакции при вирусных инфекциях. Реакции торможения гемагглютинации, торможения гемадсорбции, нейтрализации.

13. Этиология острых респираторных вирусных заболеваний. Классификация вирусов гриппа. Общая характеристика. Свойства структурных и неструктурных вирусных белков. Геном вируса. [из лекции по ОРВИ (2006 год)]

Этиология ОРВИ: вирусы гриппа (ортопарамиксовирусы), вирусы парагриппа, ревирусы, респираторные коронавирусы, пикорнавирусы (род - риновирус), р. Энтеровирус (ЭКХО, коксаки). Днк-содеращие – adenoviridae.

Вирусы гриппа семейства Orthomixoviridae (ortos – правильный, mixo - слизь) 3 рода вирусов гриппа:

1. Influensa вирус A [influere - вторгаться]

2. Influensa вирус B

3. Influensa вирус C

А вызывает заболевания у животных и птиц. В и С только у человека.

Грипп- это ОРВИ, поражающее органы дыхания, передается аэрозольным путем (ВКП) и принимает эпидемическое и пандемическое распространение.

Эпидемия – увеличение заболеваемости в 4,5 раза

Пандемия – распространение на всех континентах.

Морфология вируса гриппа.

Вирион имеет шаровидную форму, хотя могут быть и нитевидные вирионы. Размер - 80-120 нм. Геном, расположенный в центре, представлен однонитчатой «-»РНК. Белки РВ1, РВ2, РА.

РВ1 – выполняют функцию транскриптазы (РНК-зависимая-РНК-полимераза).

РВ2 – выполняют функцию эндонуклеазы.

РВ – является репликазой.

Геном покрыт капсидной оболочкой NP. Вирион гриппа сложный – имеет суперкапсид. Он состоит из трех слоев:

1. внутренний М-белок

2. 2 слоя липидов, встроены рецепторы (гликопротеиды).

3. гемагглютинины, представлены триммером, состоящим из трех мономеров по 75 кД.

Имеет 2 субъединицы: Н1 и Н2.

Функции гемагглютинина:

1. рецепторная

2. обеспечивает слияние суперкапсида вириона с мембранным комплексом

3. он определяет пандемичность вируса

4. обладает протективными свойствами

N – белок – тетрамер. Состоит из 4-х мономеров (М = 200 – 250 кД).

Функции N – белка (нейраминидаза) :

1. Совместно с Н – белком образует пандемичность и эпидемичность. Вирусы гриппа агглютинируют большое количество эритроцитов.

2. Отщеплет нейраминовую кислоту от мембраны клетки и обеспечивает выход из клетки.

Геном вируса.

Г

гены

еном фрагментированный (8 фрагментов кодируют 10 белков).

неструктурный белок

14. Антигенная структура вирусов гриппа и ее изменчивость, роль в эпидемическом и пандемическом распространении гриппа. Механизмы естественного и приобретенного иммунитета. [из лекции по ОРВИ (2006 год)]

Антигенная структура.

Вирус гриппа содержит 2 АГ:

• Внутренний S (solution – раствор) состоит из NP и M белка. Родоспецифичный АГ (общий для вирусов типа А, определяют в РСК и по этому белку вирусы делят на 3 рода)

• Наружный АГ V (variable) – состоит из H и N. Идет деление вируса А на варианты и штаммы. Типоспецифический.

Репродукция.

Вирусы прикрепляются к чувствительным клеткам верхних дыхательных путей с помощью гемагглютинина, проникает внутрь клетки, теряет часть оболочки, «-»РНК вириона стремится к ядру, в ядре начинается процесс транскрипции и репликации вируса. Для транскрипции РНК необходим КЭП – участок на 5´конце иРНК, который состоит из метилированного гуанидина и 10-13 прилежащих нуклеотидов. КЭП необходим для иРНК вируса, чтобы она распознала рибосому клетки. Если не будет КЭП – трансляция не будет идти. В ядре с помощью РВ2 фермент откусывает КЭП от клеточной иРНК, а т.к. синтез клеточной иРНК происходит в ядре, вирусная иРНК должна проникнуть в ядро. В ядре синтезируется 3 типа вирусоспецифической РНК:

1. +РНК (иРНК, которая содержит на 5´конце КЭП клетки, а на 3´ конце полиадениловые последовательности).

2. кРНК - матрица для синтеза вирусной РНК. КЭП и полиадениловая последовательность отсутствуют.

3. –РНК – синтезируется с помощью РА фермента на матрице кРНК.

АГ изменчивость вируса гриппа.

Уникален – обладает двумя типами АГ-изменчивости:

1. АГ дрейф – постепенная замена АК в нейроминидазе и гемагглютинине (или в одном или в обоих сразу в результате мутаций), которая приводит к тому, что через 2-3 года, а иногда и ранее, выработавшийся иммунитет обеспечивает лишь частичное обезопашивание от заболевания.

2. АГ – шифт или скачок – присущ вирусу гриппа А и характеризуется полной заменой гемагглютинина и нейраминидазы в результате генетических рекомбинаций, происходит при попадании 2 вирусов. Тогда в результате фрагментированного генома идет обмен генами.

Иммунитет.

В верхних дыхательных путях вирус могут блокировать ингибиторы вирусной активности, которые экранируют мукоидные рецепторы клетки и ингибируют адсорбцию. С 1-х часов инфекции вирус индуцирует образование интерферона.

Антитела.

Появляются на 3-7 день. В клеточные реакции включаются Т-киллеры, действуют на клетки, генетически измененные вирусом. Неспецифические реакции – воспаления, температурные реакции.

Эпидемиология.

Не имеет аналогов.

Источник инфекции – больной человек. Опасны больные с легкими и атипичными формами. Наиболее заразен в 1-е несколько дней.

Распространению способствует:

1. легкость пути передачи

2. короткий инкубационный период

3. всеобщая восприимчивость

4. существование нескольких типов вируса гриппа

5. уникальная АГ – изменчивость

Иммунитет штаммо- и вариантоспецифичен.

15. Механизмы патогенеза, специфическая и неспецифическая терапия и профилактика гриппа. [из лекции по ОРВИ (2006 год)]

Патогенез.

Попадает аэрозольным путем в цилиндрический эпителий верхних дыхательных путей, где проходит короткий инкубационный период. Далее он выходит в кровь (продромальный период) → по эндотелию капилляров ВДП в ВДП, повреждает эндотелий → кашель, ринит. В результате повышения проницаемости вируса → отек мозга с летальным исходом. После гриппа присоединяются осложнения чаще бактериальной природы.

Методы профилактики и лечения.

• Вакцины

За месяц до начала эпидемии надо закончить вакцинацию. Живые, убитые, вир. реассоциантов. Вакцины понижают заболеваемость в 2-2,5 раза.

• Лейкоцитарный интерферон

• Противогриппозный - γ - агглютинин.(готовые донорские АТ).

• Химические средства: (ремантадин для профилактики 2 раза в сутки по 50 мг в течении 6 дней)

Механизм действия: нарушают депроитенизацию вируса. К нему вырабатывается резистентность.