
- •01. Современные принципы классификации и таксономии вирусов.
- •02. Структура, свойства и особенности вирусов. Понятие о вирионе, вироиде.
- •03. Химический состав вирусов, значение различных химических компонентов. Ферменты вирусов.
- •05. Методы культивирования, индикации и идентификации вирусов.
- •06. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций
- •07. Ортомиксовирусы. Классификация и характеристика семейства. Вирусы а, в, с. Структура вириона
- •08. Антигенная структура, серотипы, антигенная изменчивость (дрейф и шифт). Особенности различных серотипов вируса гриппа (h1n1, h5n1) и др.
- •09. Патогенез гриппа. Иммунитет.
- •10. Лабораторная диагностика, лечение и профилактика гриппа.
- •11. Парамиксовирусы (Рaramyxoviridae)
- •12. Вирусы парагриппа человека
- •13. Вирус паротита
- •14. Пневмовирусы – респираторно-синтициальный вирус
- •15. Морбиливирусы, вирус кори
- •16. Семейство пикорнавирусов: классификация и характеристикасемейства (Picornaviridae)
- •17. Вирус полиомиелита:свойства, патогенез, иммунитет (Poliovirus).
- •18. Лабораторная диагностика, профилактика, лечение полиомиелита
- •20. Ротавирусы
- •21. Аденовирусы: класс-ция и хар-ка сем. Аденовирусы чел-ка, стр-ра вириона, патогенез, иммунитет, диагностика аденовирусных инфекций.
- •22. Рабдовирусы: класс-ция, стр-ра вириона, патогенез бешенства, иммунитет.
- •23. Лабораторная диагностика, специфич профилактика бешенства.
- •24. Герпесвирусы: класс-ция сем, стр-ра вириона.
- •26. Вирус ветряной оспы и опоясывающего лишая
- •27. Цитомегаловирус (цмв) (подсемейство Betaherpesvirinae)
- •28. Вирус Эпштейна-Барр (вэб) (подсемейство Gammaherpesvirinae)
- •29. Семейство тогавирусов (Togaviridae), флавивирусы. Клещевой энцефалит.
- •30. Вирус краснухи (Род Rubivirus)
- •31. Вирус гепатита а. Классификация и общая характеристика, роль в патологии человека, патогенез, иммунитет, лабораторная диагностика и профилактика гепатита а.
- •32. Вирус гепатита в. Классификация и общая характеристика, роль в патологии человека, патогенез, иммунитет, лабораторная диагностика и профилактика гепатита в.
- •33. Вирус гепатита d. Классификация и общая характеристика, роль в патологии человека, патогенез, иммунитет, лабораторная диагностика и профилактика гепатита d.
- •34. Вирус гепатита c. Классификация и общая характеристика, роль в патологии человека, патогенез, иммунитет, лабораторная диагностика и профилактика гепатита c.
- •35. Ретровирусы: классификация и характеристика семейства. Вирусы иммунодефицита человека (вич – 1 и вич – 2), структура вириона.
- •20.1.12.1. Вирус иммунодефицита человека (вич)
- •36. Патогенез вич-инфекции. Спид-ассоциацированные заболевания.
- •37. Лабораторная диагностика и профилактика вич.
05. Методы культивирования, индикации и идентификации вирусов.
Культивирование вирусов человека проводят с целью лабораторной диагностики вирусных инфекций, для изучения вопросов патогенеза и иммунитета, для получения диагностических и вакцинных препаратов. Так как вирусы абсолютные паразиты, то их культивируют в организме или в живых клетках.
Для культивирования вирусов используют лабораторных животных, развивающиеся куриные эмбрионы, культуры клеток.
Лабораторных животных разными способами заражают (учитывают тропизм вирусов: ортомиксовирусами заражают интраназально, нейровирусами – субдурально). На основании типичных признаков заболевания и патоморфологических изменений органов животных можно судить о репродукции вирусов, т.е. проводить индикацию вирусов.
Куриный эмбрион является удобной моделью для культивирования вирусов, т.к. полости его стерильны, защищены твердой оболочкой. Индикацию вируса в курином эмбрионе проводят: по гибели эмбриона; помутнению хорион-аллантоисной оболочки; образованию бляшек на оболочке; в реакции гемагглютинации (происходит склеивание эритроцитов под действием гемагглютинина вирусов, который расположен в шипах суперкапсида).
Метод культур клеток. Для приготовления культур клеток используют различные ткани человека и животных. Чаще применяют культуры клеток из эмбриональных (куриные фибробласты, человеческие фибробласты) и опухолевых (злокачественно перерожденных) тканей, обладающих активной способностью к росту и размножению.
Различают три типа культур клеток: однослойные культуры клеток; культуры суспензированных клеток; органные культуры.
Однослойные культуры клеток по числу жизнеспособных генераций разделяют на первичные или первично трипсинизированные (куриные фибробласты, человеческие фибробласты); перевиваемые (способны размножаться в лабораторных условиях длительное время); полуперевиваемые (способны размножаться в течение 40-50 пассажей).
Для культивирования клеток необходимы питательные среды, которые по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие. В составе ростовых питательных сред должно содержаться больше питательных веществ, чтобы обеспечить активное размножение клеток для формирования монослоя. Поддерживающие среды должны обеспечивать лишь переживание клеток в уже сформированном монослое при размножении в клетке вирусов.
Широкое применение находят стандартные синтетические среды, например, синтетическая среда 199 и среда Игла. Независимо от назначения все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса. Неотъемлемый компонент большинства ростовых сред – наличие 5-10 % сыворотки крови животных (телячьей, бычей, лошадиной), без наличия которой размножение клеток и формирование монослоя не происходит. В состав поддерживающих сред сыворотка не входит.
Культуры суспензированных клеток растут и размножаются во взвешенном состоянии при постоянном интенсивном перемешивании среды. Они используются для накопления вирусов.
Некоторые вирусы размножаются в органных культурах – это кусочки органов, выращенные вне организма и сохраняющие структуру данного органа.
О размножении вируса в культуре клеток судят по следующим признакам: цитопатогенному действию (ЦПД); образованию в клетках включений; появлению бляшек; феномену гемадсорбции; цветной пробе.
Цитопатогенное действие может проявляться полной дегенерацией клеток – слущиванием клеток с поверхности стекла после их гибели (энтеровирусы полиомиелита, Коксаки); частичной дегенерацией – округлением клеток, слиянием и образованием симпластов (вирус кори).
Образование включений в клетках – это скопление вирионов или отдельных компонентов в цитоплазме или в ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус натуральной оспы образует цитоплазматические включения – тельца гварниери, вирусы герпеса, аденовирусы – внутриядерные включения.
Появление бляшек – зоны клеток, разрушенных вирусом (негативные колонии вирусов), обнаруживают в клеточных культурах, растущих на стекле и покрытых тонким слоем агара. Бляшки различаются по величине, форме, времени появления, поэтому данный тест используют для дифференциации вирусов.
Реакция гемадсорбции заключается в способности клеток, зараженных вирусами, адсорбировать на своей поверхности эритроциты, потому что эти клетки несут на поверхности гемагглютинины вируса.
Цветная реакция основана на изменении цвета питательной среды с индикатором, используемой для культур клеток. При росте клеток, не пораженных вирусом, идет накопление продуктов метоболизма, которые изменяют цвет питательной среды. При репродукции вирусов в культуре нарушается метаболизм клеток, и среда сохраняет первоначальный цвет.
При отсутствии ЦПД можно поставить реакцию интерференйии – исследуемая культура повторно заражается вирусом, вызывающим ЦПД. В положительном случае ЦПД будет отсутствовать (реакция интерференции положительная), если в исследуемом материале вируса не было, наблюдается ЦПД.