
- •Пояснювальна записка
- •Правила техніки безпеки в лабораторії біохімії
- •Лабораторна робота №1 тема: якісні реакції на амінокислоти та білки
- •Теоретична частина
- •Контрольні запитання та завдання
- •Література
- •Виконання роботи
- •Лабораторна робота №2 тема: реакції осадження білків
- •Теоретична частина
- •Контрольні запитання та завдання
- •Література
- •Виконання роботи
- •Лабораторна робота №3 тема: загальні властивості ферментів
- •Теоретична частина
- •Контрольні запитання та завдання
- •Література
- •Виконання роботи
- •Лабораторна робота №4 тема: кількісне визначення активності ферментів
- •Теоретична частина
- •Контрольні запитання та завдання
- •Література
- •Виконання роботи
- •Приготування препарату каталази
- •Проведення ферментативної реакції
- •Титрування
- •4. Проведення розрахунків
- •Лабораторна робота №5 тема: обмін вуглеводів і ліпідів
- •Теоретична частина
- •Контрольні запитання та завдання
- •Література
- •Виконання роботи
Контрольні запитання та завдання
Яка роль білків у побудові живої матерії та процесах життєдіяльності?
Розкажіть про амінокислотний склад білків.
Як гідролізувати білки до вільного стану? Напишіть рівняння реакції гідролізу трипептиду гліцил – аланіл – лейцину до відповідних амінокислот.
Які методи визначення первинної структури білків вам відомі?
Напишіть структурну формулу пептиду фалоїдину. Який заряд має молекула цього пептиду у водному розчині?
Напишіть хімічні формули гетероциклічних білкових амінокислот, наведіть їх назви за міжнародною номенклатурою.
Лізин містить 19,17% Нітрогену. Розрахуйте відносну молекулярну масу лізину, якщо відомо, що в молекулі лізину міститься два атоми Нітрогену.
Література
Шевряков М.В., Яковенко Б.В., Явоненко О.Ф. Практикум з неорганічної хімії. Суми.: Університетська книга, 2003 рік – стор. 8 – 13.
Фримантл М. Химия в действии. М.: Мир, 1991 год – т.2, стор. 527, 529 – 230.
Виконання роботи
ДОСЛІД 1. БІУРЕТОВА РЕАКЦІЯ.
До 1 – 2 мл розведеного розчину білка додайте подвійний об'єм розчину натрій гідроксиду (ω = 30%), добре перемішайте і внесіть за допомогою скляної палички кілька крапель розчину купрум (ІІ) сульфату (ω = 1%). Знову ретельно перемішайте. Спостерігайте появу рожево-фіолетового забарвлення. Якщо було внесено велику кількість розчину купрум сульфату, то надлишок купрум (ІІ) гідроксиду, який при цьому утвориться, маскуватиме рожево-фіолетове забарвлення мідного комплексу білка і весь розчин набуде синього кольору.
ДОСЛІД 2. НІНГІДРИНОВА РЕАКЦІЯ.
До 2 – 3 мл розведеного розчину білка додайте розчин нінгідрину (ω = 1%) в ацетоні (ω = 95%). Перемішайте і нагрівайте на киплячій водяній бані при t◦ = 70◦С 15 – 20 хвилин. Спостерігайте розвиток синьо-фіолетового забарвлення.
ДОСЛІД 3. КСАНТОПРОТЕЇНОВА РЕАКЦІЯ.
До 1 – 2 мл розчину білка додайте 5 – 6 крапель концентрованої нітратної кислоти до появи білого осаду або помутніння і нагрівайте на киплячій водяній бані. Спостерігайте забарвлення осаду та розчину в жовтий колір і поступове майже повне розчинення осаду.
Охолодіть суміш. Не перемішуючи, додавайте краплинами до кислого розчину надлишок концентрованого розчину амоніаку або лугу до лужної реакції середовища. Спостерігайте забарвлення вмісту в яскраво-оранжевий колір внаслідок виникнення в лужному середовищі хромофорної групи.
ДОСЛІД 4. РЕАКЦІЯ АДАМКЕВИЧА.
У пробірку помістіть близько 0,5 мл нерозведеного білка додайте 2 мл льодяної оцтової кислоти, до якої внесено трохи гліоксалевої кислоти. Спостерігайте утворення осаду.
Нагрійте суміш до розчинення утвореного осаду. Охолодіть пробірку із сумішшю. Нахиливши пробірку, обережно по стінці приливають близько 1 мл концентрованої сульфатної кислоти так, щоб рідини не змішувалися, а утворили два шари. Спостерігайте появу на межі двох рідин червоно-фіолетового кільця.
ДОСЛІД 5. РЕАКЦІЯ ПАУЛІ.
До 1 мл розчину сульфанілової кислоти (ω = 1%) в розчині хлоридної кислоти (ω = 5%) додайте 2 мл розчину натрій нітрату (ІІІ) (ω = 0,5%), ретельно перемішайте і додайте спочатку 2 мл розведеного розчину білка, а потім (після перемішування вмісту пробірки) 6 мл розчину натрій карбонату (ω = 10%) і знову перемішайте. Спостерігайте появу вишнево-червоного забарвлення.
ДОСЛІД 6. НІТРОПРУСИДНА РЕАКЦІЯ.
У пробірку помістіть 1 – 2мл розведеного білка, додайте рівний об'єм насиченого розчину амоній сульфату1 2 – 3 краплини розчину натрій нітропрусиду (ω = 5%). Додайте кілька краплин концентрованого розчину амоніаку.
Якщо в результаті цього спостерігаєте появу пурпурового забарвлення, можна зробити висновок про наявність у білку цистеїну.
Напишіть рівняння відповідних реакцій.
ВИСНОВОК: У висновку зазначте, які кольорові реакції використовуються для виявлення білків, амінокислот та пептидів.