2.2.1.1.Механизм образования мягкого сгустка.

В результате взаимодействия агрегированных тромбоцитов (см. Гемостаз: схема гемостатических реакций) с факторами свертывания крови образуется тромбин. Активность его быстро увеличивается и, по достижении ею критического уровня, происходит свертывание крови (превращение фибриногена в фибрин) в тромбоцитном агрегате и на его поверхности. Таким образом тромбоцитный агрегат укрепляется нитями фибрина и "застрявшими" в фибриновой сети эритроцитами и лейкоцитами.

Тромбоцитная гемостатическая пробка - тромбоцитный агрегат, образующийся в месте повреждения сосуда вследствие взаимодействия тромбоцитов с компонентами поврежденного сосуда и закрывающий возникший дефект сосуда. В отличие от сгустка крови тромбоцитная гемостатическая пробка не содержит нитей фибрина. Этот большой агрегат способеностановить кровотечение из капилляров и венул (см. Гемостаз: схема гемостатических реакций). В литературе его часто называют " первичная (временная) гемостатическая пробка ".

Особую роль в формировании тромбоцитной пробки играют тромбоксан А2 и тромбин, постепенно образующийся на поверхности агрегированных тромбоцитов благодаря активации свертывания крови и самих тромбоцитов. С появлением тромбоксана А2 и тромбина обратимая до того агрегация становится необратимой.

2.2.2. Протромбин и тромбин.

Протромбин - витамин К-зависимый гликопротеин, относится к альфа2-глобулинам, образуется в печени, участвует в конечной стадии коагуляции крови. Протромбин синтезируется в клетках печени и секретируется в кровь. В процессе коагуляции крови протромбин превращается в тромбин путем протеолиза фактором Xa в присутствии фактора Va, ионов кальция и фосфолипидов.  В результате протеолитического расщепления активированным фактором Х связи аргинин 274- тирозин 275 с амино-конца протромбина высвобождается фрагмент с мол.м. 32000. Затем в сохраненном фрагменте разрывается связь аргинин 323- изолейцин 324, вследствие чего образуется активный тромбин (сериновая протеаза), который вызывает превращение фибриногена в фибрин. Тромбин осуществляет превращение фибриногена в нерастворимый сгусток фибрина.

Фактор II - фактор протромбинового комплекса.

Тромбин (EC 3.4.21.5) - сериновая протеиназа семейства трипсина - ключевой ферментсвертывающей системы крови, который превращает фибриноген в фибрин - основу тромба, участвует в регуляции многих физиологических и патофизиологических процессов, таких как свертывание крови и противосвертывающие механизмы, тромбообразование и фибринолиз, регуляция сосудистого тонуса и процессов развития организма, а также в процессах воспаления, репарации тканей, атерогенеза, канцерогенеза и болезни Альцгеймера [Струкова ea 1977, Струкова ea 1998  Henrikson, ea 1999, Glusa, ea 1996, Carney, ea 199 , Grand, ea 1996]. Активация свертывания крови и образование тромбина происходят при воспалении, заживлении ран, атерогенезе и других процессах, индуцируемых при повреждении эндотелия сосудов. Тромбин образуется из протромбина на заключительном этапе свертывания крови и превращает растворимый фибриноген в нерастворимый фибриновый сгусток, при этом реализуется высокоспецифическое взаимодействие участка фибриногена, содержащего фибринопептиды А и В, с отрицательно заряженным центром узнавания тромбина, удаленным от каталитического участка активного центра (рис. 4.8а,б). Тромбин активирует за счет реакций ограниченного протеолиза факторы свертывания V , VIII , XIII и белок СИ. В результате связывания с тромбомодулином тромбин теряет свертывающую активность. Гормональные свойства тромбина проявляются при взаимодействии с рецепторами на тромбоцитах ,эндотелиальных и других клетках. Благодаря такого рода взаимодействиям происходит активация тромбоцитов и секреция содержимого их гранул, активация эндотелиальных клеток и секреция простациклина, тканевого активатора плазминогена, стимуляция хемотаксисалейкоцитов. Многие функции тромбина реализуются при его взаимодействии с рецепторами семейства PAR, при активации клеток крови и соединительной ткани, таких как тромбоциты, клетки эндотелия, лейкоциты, гладкомышечные и тучные клетки.

Полифункциональность тромбина обусловлена особенностями его структуры и наличием кроме классического активного центра нескольких субцентров, называемых экзосайтами или субцентрами связывания субстратов и рецепторов. Эти субцентры отвечают за высокоспецифическое связывание тромбина с субстратами и рецепторами и высокую избирательность в расщеплении связей и отборе субстратов [Струкова ea 198 , Stubbs, ea 1993, Fenton, ea 1995]. Структурно-функциональные особенности тромбина и механизмы его протеолитической активности в отношении фибриногена и других субстратов - белков системы свертывания крови - достаточно хорошо изучены и обсуждены [Струкова ea 1989, Stubbs, ea 1993, Fenton, ea 1995, Stubbs, ea 1995].

Весьма актуальной и менее известной областью представляется участие тромбина в реакциях воспаления и репарации тканей, всегда сопровождающихся активацией системы свертывания, генерацией и концентрацией тромбина в участке повреждения сосуда и прилежащей ткани. До последнего времени тромбин расценивали в основном как провоспалительный фактор, не учитывая его модулирующего влияния на функции клеток [Cirino, ea 1996, Kranzhofer, ea 1996, Moms, ea 1994]. В связи с этим представляет интерес изучение роли тромбина в реакциях, направленных на ограничение воспалительного процесса: блокаду адгезии клеток к поврежденному участку сосуда, ингибирование секреции медиаторов воспаления тучными клетками. Тромбин, образующийся в участке повреждения сосудов, активирует многие клетки, вовлекаемые в процессы воспаления и репарации, в том числе моноциты, Т- лимфоциты крови и тучные клетки соединительной ткани, которые локализованы в основном вдоль сосудов [Струкова ea 1977, Струкова ea 1998, Henrikson, ea 1999, Glusa, ea 1996, Carney, ea 1992].

Тучные клетки участвуют в активации клеток эндотелия, миграции лейкоцитов, образовании отека и других процессах, вовлекаемых в репарацию тканей. Они активируются иммунными и неиммунными либераторами и освобождают медиаторы и модуляторы воспаления [Valent, ea 1998, Bissonnette, ea 1997, Galli, ea 2000].

2.2.2.1.Протеолитическая активность тромбина.

2.2.3. X фактор.

Фактор X - (F X, фактор Стюарта, factor Stuart-Power) - витамин К -зависимый гликопротеин плазмы крови, участвующий в процессе коагуляции крови. В процессе свертывания крови фактор X (F X) превращается из неактивной формы зимогена в активную протеазу (F Xa) путем протеолиза. Фактор X (F X) (М 58000) состоит из легкой (М 16200) и тяжелой (М 42000) цепей, связанных дисульфидными связями.

Легкие цепи фактора X (F X) содержат 11 гамма-карбоксилированных глутаминовых остатков, чья функция заключается в связывании ионов кальция (Stenflo J.,1977) и единственной бета-гидроксиаспарагиновой кислоты ( cMullen B.A.,1983; Fernlund P.,1983).

Тяжелые цепи содержат пептидные связи, расщепляющиеся при активации фактора X (F X) и содержат каталитические области, существенные для протеолитической активности фактора X (F X). Аминокислотная последовательность каталитической области гомологична каталитическим областям других сериновых протеаз, включая многие факторы свертывания крови.

В лабораторных условиях было показано, что фактор X (F X) синтезируется в клетках гепатомы крысы и человека, как предшественник из единой полипептидной цепи. После секреции в культуральную среду одноцепочечная форма превращается в двухцепочечную.