7. Стерилизация. Способы и контроль стерилизации.

Стерилизация — уничтожение различных микроорганизмов и их спор с помощью физических и химических факторов. К физическим факторам стерилизации относятся высокая температура, ультрафиолетовые лучи, ионизирующие излучения, ультразвук и фильтрование через бактериальные фильтры. В лабораторной практике стерилизация с помощью высокой температуры достигается прокаливанием на пламени, прогреванием сухим жаром, кипячением, обработкой текучим паром или паром под давлением.

Стерилизация на пламени является простым и надежным методом для обработки различных термоустойчивых объектов: игл, бактериальных петель, микробиологических шпателей, пипеток, предметных и покровных стекол, пинцетов и т. п. Стерилизация сухим жаром производят в сушильном шкафу (печь Пастера). Этим методом стерилизуют только сухие предметы — лабораторную посуду, перевязочный материал и т. п. Сушильный шкаф представляет собой небольшой железный шкаф, с двойными стенками, между которыми вложен теплоизоляционный материал (асбест, стекловата). Чисто вымытые пробирки и флаконы закупоривают ватными пробками; пипетки, вату, марлю заворачивают в бумагу и помещают на полки шкафа так, чтобы стерилизуемые предметы не касались горячих стенок прибора и нагретый воздух свободно проникал между ними. Стерилизация в сушильном шкафу продолжается 45 минут — 1 час при t° 160—170°, При температуре выше   175° бумага и вата сгорают. Кипячение в воде уничтожает неспоровые формы микробов за 1—3 мин. Шприцы, иглы, ножи, небольшие инструменты и т. п. можно кипятить в металлических стерилизаторах и даже в обычной кастрюле. Прибавление к воде небольшого количества гидрокарбоната натрия (двууглекислой соды) повышает эффективность стерилизации. Флаконы, пробирки или ампулы с жидкостью можно стерилизовать кипячением в водяной бане (рис. 5). Однократное кипячение не уничтожает спор микробов, поэтому при необходимости применяется фракционная стерилизация, т. е. кипячение по 30—40 минут в течение трех дней подряд Стерилизация паром под давлением — наиболее надежный способ стерилизации; при однократной обработке материала уничтожаются не только вегетативные формы бактерий, но и их споры. Стерилизация паром под давлением проводят в специальных приборах — автоклавах под давлением до 1 избыточной атмосферы (am), что соответствует t° 119—120°. Таким путем в течение 15—20 мин. производят стерилизацию заразного материала, посуды, приборов, особенно имеющих резиновые части, питательных сред, не содержащих нативного белка и углеводов. Основные части автоклава: кожух, водопаровая камера, стерилизационная камера, крышка с резиновой прокладкой. Водопаровая камера из специальной высококачественной; стали предназначена для получения пара. Предназначенный для стерилизации материал помещают в стерилизационную камеру. Массивная крышка с резиновой прокладкой наглухо закрывает     водопаровую  камеру. Система подачи нагретого пара отделена от стерилизационной камеры. Пар подается в стерилизационную камеру через патрубок от котелка, снабженного электронагревательным элементом с регулятором степени нагрева. К автоклаву придается арматура: манометр с сифонной трубкой и трехходовым краном, водомерная стеклянная трубка для измерения уровня воды в водопаровой камере автоклава, предохранительный клапан для предупреждения чрезмерного повышения давления в автоклаве, воздушный и спускной краны для удаления воздуха в начале стерилизации и для удаления конденсата из стерилизационной камеры.

Лучевая (холодная) стерилизация — метод, при котором в качестве стерилизующего агента применяются некоторые виды ионизирующих излучений, пригодных для стерилизации пищевых продуктов, перевязочных материалов, лечебных и диагностических препаратов, антибиотиков, вакцин. Для стерилизации обычно используют гамма-излучения радиоактивных веществ и электроны высоких энергий, полученные на ускорителях. Для получения стерилизующего эффекта необходимы высокие дозы облучения. Так, для гибели дрожжевых клеток необходимо облучение в дозе 200 000 р, а бактерий кишечной группы — 400 000—600 000 р. Для обеспложивания материалов, содержащих споры бактерий, необходимы еще большие дозы — 1,5— 2,5 млн. р. Стерилизация ультрафиолетовым облучением проводится с помощью любого источника ультрафиолетовых лучей, чаще всего бактерицидных ламп. Бактерицидные лампы можно применять для обеззараживания воздуха и поверхностей помещений, различных предметов и оборудования, воды и пищевых продуктов. При работе с бактерицидными лампами, когда они находятся в поле зрения, надо обязательно защитить глаза специальными очками и иметь в виду, что облучение бактерицидной лампой может вызвать ожог кожи лица и рук. Стерилизация при помощи бактериальных фильтров применяется в тех случаях, когда стерилизуемые растворы (среды) не переносят нагревания, когда необходимо удалить микробы из той или иной жидкости, существенно не нарушив ее состава и свойств. Например, фильтруют воду, загрязненную микробами, мочу, асцитическую жидкость, кровяную сыворотку, а также бульонные культуры для получения содержащихся в бульоне продуктов обмена веществ бактерий (микробные яды, антибиотики и пр.). После фильтрования все эти жидкости оказываются стерильными, так как фильтры надежно задерживают микробы. Контроль стерилизации. Эффективность стерилизации контролируют химическими индикаторами (веществами, имеющими определенную точку плавления), реже — биологической пробой. При первом способе вещество-индикатор, смешанное с каким-нибудь красителем, в запаянной стеклянной трубочке помещают в автоклав и по его расплавлению и окрашиванию определяют температуру, при которой проводили стерилизацию. Для этой цели употребляют бензонафтол (t° плавления 110°), антипирин (t° плавления 110— 112°), резорцин (t° плавления 110°), серу (t° плавления 120°), бензойную кислоту (t° плавления 121,7°). При втором способе внутрь автоклава в стерильной упаковке кладут шелковые нити, смоченные споровым материалом; после окончания стерилизации их переносят на питательные среды и выращивают в течение 2—3 суток при t° 37°. Отсутствие роста указывает на хорошее качество обработки материала.