Цветная проба по определению серотипа вируса полиомиелита.

Цель реакции: определить серотип вируса полиомиелита.

Компоненты:

1. Среда Игла с индикатором фенолрот.

2. Культура клеток.

3. Вируссодержащий материал (смыв из зева, фекалии, спинномозговая жидкость)

4. Вируснейтрализующие сыворотки 1,2,3 типов

Техника постановки:

1. Исследуемый материал делят на 3 части и поотдельности обрабатывают сыворотками.

2. Полученной смесью заражают культуру клеток, которые находятся в среде Игла в 3 пробирках. В 1 пробирку иссл.материал + сыворотка против 1 серотипа полиовируса, во 2- против 2, в 3 – против 3.

3. Инкубация в термостате 24-72 часа.

4. Учет результатов: положительной считается та реакция, где, сыворотка нейтрализовала вирус и он не оказывает ЦПД на культуру клеток, т.е клетки продолжают расти и выделять свои кислые продукты метаболизма: меняется рН и за счет индикатора произошло изменение цвета среды с красного на желтый. А где цвет не меняется, там сыворотка не комплементарна вирусу и он оказывает ЦПД, тем самым убивая клетки.

Фаготипирование стафилококка.

Цель реакции: определение фаговара стафилококка.

Компоненты:

1. Суточная бульонная культура стафилококка.

2. Чашка Петри с МПА.

3. Набор типоспецифических фагов.

4. Шпатель Дригальского.

5. Пастеровская пипетка.

Техника постановки:

1. Испытуемую суточную культуру стафилококков засевают на поверхность МПА с помощью шпателя, слегка подсушивают в термостате.

2. С обратной стороны чашки поверхность делят на квадраты, их количество зависит от количества фагов. Нумеруют. В каждый квадрат на агаре вносят по одной капле типоспецифических фагов с помощью пастеровской пипетки

3. Инкубация в термостате 24 часа.

4. Учет результатов: фаготип стафилококка определяется тем типом фага, который вызвал лизис культуры.

Рпга при туляремии с парными сыворотками.

Цель реакции: определить антитела к возбудителю туляремии и определить стадию заболевания по нарастанию титра антител.

Компоненты реакции:

1. Парные сыворотки исследуемого человека (взятые на 7 и 14 день заболевания).

2. Эритроцитарный антигенный туляремийный диагностикум.

3. Физ. Раствор

Техника постановки:

1. В 2 ряда лунок вносят по 1 мл ф/р.

2. Титруют сыворотки: в 1 ряду первую сыворотку, во 2 – вторую.(10,20,40,80,160,320)

3. Внесение эритроцитарного антигенного диагностикума по 3 капли в каждую лунку.

4. Инкубация в термостате 2 часа

5. Учет результатов: если осадок в виде хлопьев геммаглютинации («зонтики»), то реакция +, если в виде осадка эритроцитов («пуговки»), то реакция -.

6. Диагностический титр:1:20

Заключение: Предварительный диагноз – туляремия, т.к. титр антител увеличился в 4 раза с 1:40 с 1 сывороткой, а со 2 – 1:320.

Рпга с материалом больного чумой (гной, мокрота) и эритр.Ат чумным диагностикумом

Цель реакции: определить возбудителя чумы в исследуемом материале.

Компоненты реакции:

1. Материал от больного чумой (гной, мокрота).

2. Эритроцитарный антительный чумный диагностикум.

3. Физ. Раствор

Техника постановки:

1. В 1 ряд лунок вносят по 1 мл ф/р.

2. Титруют исследуемый материал (10,20,40,80,160,320)

3. Внесение эритроцитарного антительного диагностикума по 3 капли в каждую лунку.

4. Инкубация в термостате 2 часа

5. Учет результатов: если осадок в виде хлопьев геммаглютинации («зонтики»), то реакция +, если в виде осадка эритроцитов («пуговки»), то реакция -.

6. Диагностический титр:1:20

Заключение: Предварительный диагноз – чума.