Рпга при бруцеллезе с 1 и 2 сыворотками.

Цель реакции: определить антитела к бруцеллам и определить стадию заболевания по нарастанию титра антител.

Компоненты реакции:

4. Парные сыворотки исследуемого человека (взятые на 7 и 14 день заболевания).

5. Эритроцитарный антигенный бруцеллезный диагностикум.

6. Физ. Раствор

Техника постановки:

7. В 2 ряда лунок вносят по 1 мл ф/р.

8. Титруют сыворотки: в 1 ряду первую сыворотку, во 2 – вторую.(10,20,40,80,160,320)

9. Внесение эритроцитарного антигенного диагностикума по 3 капли в каждую лунку.

10. Инкубация в термостате 2 часа

11. Учет результатов: если осадок в виде хлопьев геммаглютинации («зонтики»), то реакция +, если в виде осадка эритроцитов («пуговки»), то реакция -.

12. Диагностический титр:1:20

Заключение: Предварительный диагноз – бруцеллез, т.к. титр антител увеличился в 4 раза с 1:40 с 1 сывороткой, а со 2 – 1:320.

Реакция Райта

Цель реакции: определить наличие антител в сыворотке исследуемого человека к возбудителю бруцеллеза.

Компоненты реакции:

1. Физиологический раствор для разбавления сыворотки исследуемого человека.

2. Парные сыворотки (взятые у исследуемого человека в разное время) исследуемого человека

3. Антигенный бруцеллезный диагностикум

Техника постановки:

1. физиологический раствор вносят по 1 мл в 2 ряда пробирок (по 7 в каждом: 5 для постановки реакции, 2 – для контролей)

2. внесение сыворотки исследуемого человека в 1 пробирку в таком объеме, чтобы первое разведение составляло 1:50

3. титрование сыворотки в каждом ряду поотдельности

4. внесение диагностического антигена в каждую пробирку по 3 капли

5. контроль диагностикума: физ.раствор + диагностикум

контроли сыворотки: физ.раствор + сыворотка (для каждой сыворотки отдельный контроль).

6. Инкубация в термостате 2 часа

7. Учет результатов: если в пробирке происходит агглютинация (выпадение хлопьев), то реакция «+», если раствор остается прозрачным, то реакция «-». Контроли должны быть прозрачными, в противном случае реакция не учитывается и ставится заново

Диагностический титр: 1:200

Ифа на антитела к вирусу спиДа .

Цель реакции: Обнаружение наличие антител против ВИЧ в сыворотке исследуемого человека.

Компоненты:

1. Сыворотки: а)исследуемого человека б) здорового человека (отрицательный контроль) в)сыворотка больного ВИЧ (положительный контроль)

2. Планшет с лунками (на дне лунок адсорбированы антигены ВИЧ)

3. Антиглобулиновая сыворотка кролика против антител человека, меченная ферментом пероксидазой хрена.(получение: в ушную вену кролика вводят антитела человека против ВИЧ, через 7-10 дней берут его кровь, отделяют плазму, вносят в нее фермент пероксидазу, инкубируют. После этого полученную сыворотку расфасовывают по ампулам. Подписывают название препарата, дату производства. Срок годности 1 год, используют только для данного ИФА).

4. Субстрат для фермента пероксидазы – хромоген (бесцветная жидкость).

5. Буферный раствор для промывания лунок.

Техника постановки:

1. В первый ряд планшета в 3 лунки вносят сыворотку иссл.человека, во 2 ряд – здорового, в 3 – больного. Инкубация в термостате 1 час. Если у иссл. Человека есть антитела к ВИЧ, то будет образовываться комплекс антиген-антитело. Лунки промываются буферным раствором.

2. В каждую лунку вносится антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом пероксидазой. Инкубация в термостате 1 час. Антитела кролика адсорбируются на антителах человека, образуя 3хслойный комплекс (антиген-антитело-антиантитело: «сэндвич»-феномен). Лунки промываются буферным раствором.

3. Во все лунки вносится хромоген. Инкубация в термостате 30мин. Он реагирует с пероксидазой и изменяется цвет раствора с прозрачного на желтый(реакция положительная).

4. Если у человека нет антител к ВИЧ, то при 1 промывании буферным раствором, антитела смоются и при добавлении антиглобулиновой сыворотки не произойдет никакого взаимодействия. Соответственно хромоген ни с чем не будет реагировать и цвет раствора не изменится.