Інструкція до практичного заняття: «Кількісне визначення холестерину в крові і кетонових тілах у сечі»

Робота 1. Реакція Ліберманна – Бурхардта на холестерин.

Принцип роботи заснований на здатності розчину холестерину в хлороформі давати з оцтовим ангідридом і концентрованою сірчаною кислотою зелене фарбування.

Матеріальне забезпечення: екстракт холестерину, оцтовий ангідрид, концентрована сірчана кислота, піпетки, пробірки.

Хід роботи: до 1 мл хлороформного екстракту холестерину додають 10 краплі оцтового ангідриду і 2 краплі концентрованої сірчаної кислоти, добре перемішують і спостерігають зелене фарбування.

Робота 2. Визначення загального холестерину в сироватці крові по методу Илька.

Принцип роботи заснований на реакції Ліберманна – Бурхардта (див. вище).

Матеріальне забезпечення: сироватка крові, оцтовий ангідрид, концентрована сірчана кислота, піпетки, пробірки, мірні циліндри, термостат, ФЭК, кювети.

Хід роботи: на дно сухої мірної пробірки вносять 0,1 мл сироватки крові. Відмірюють циліндром 2,1 мл реактиви 1 (суміш крижаної оцтової кислоти, оцтового ангідриду і концентрованої сірчаної кислоти) і переливають у пробірку із сироваткою, перемішують, струшують і поміщають у термостат при температурі 37◦С на 20 хвилин (або при кімнатній температурі). При цьому розвивається зелене фарбування. Потім фотометрують на ФЕКе в кюветі на 5 мм проти води при червоному світлофільтрі. Для визначення змісту холестерину по знайденій оптичній щільності користуються готовим каліброваним графіком. Знайдену концентрацію холестерину множать на 1000, тому що сироватки в досвід береться 0,1 мл. Коефіцієнт перерахування в одиниці СИ (ммоль/л) дорівнює 0,0258.

Норма – 2,97 – 8,79 ммоль/л холестерини в сироватці крові

Клініко-діагностичне значення.

Гіперхолестеринемія спостерігається при атеросклерозі, цукровому діабеті, гіпотіреозі, механічній жовтяниці. Гіпохолестеринемія спостерігається при голодуванні, туберкульозі, гіпертіреозі.

Робота 3. Якісні реакції на ацетон і ацетоацетат.

Проба Легаля на ацетон.

Принцип роботи. Ацетон і ацетоацетат в лужному середовищі утворять з нітропрусидом натрію оранжево-червоне фарбування.

Матеріальне забезпечення: сеча, 10% розчин лугу, нітропрусид натрію, крижана оцтова кислота, пробірки, піпетки.

Хід роботи. У пробірку наливають 5 краплі сечі, 5 краплі 10% розчину лугу і 5 крапель нітропрусиду натрію. З'являється оранжево-червоне фарбування, що після додавання 10 крапель крижаної оцтової кислоти переходить у вишнево – червоне фарбування.

Реакція Герхардта на ацетоацетат.

Принцип роботи Ацетоацетат із хлорним залізом при кип'ятінні утворить розчин вишнево-червоного кольору.

Матеріальне забезпечення: сеча, 5% розчин хлорного заліза, пробірки, піпетки

Хід роботи До 5 крапель сечі додають по краплях 5% розчин хлорного заліза. При цьому випадає осад – сульфат фосфорно-кислого заліза. При наявності ацетатоацетату від подальшого додатка хлорного заліза з'явиться вишнево – червоне фарбування. При кип'ятінні процес відбуваєься швидко.

Клініко-діагностичне значення.

Гіперкетонемія і кетонурія спостерігаються при цукровому діабеті, голодуванні, гіперпродукції гормонів – антагоністів інсуліну.

ВИСНОВКИ:

СОДЕРЖАНИЕ ХОЛЕСТЕРИНА В КРОВИ И КЕТОНОВЫХ ТЕЛ В МОЧЕ