Тема: «определение содержания общих липидов в сыворотке крови».

Для определения липидов сыворотку предварительно гидролизуют концентрированной серной кислотой. Продукты распада липидов образуют с фосфорнованилиновым реактивом окрашенное соединение, интенсивность окраски которого определяют колориметрически.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: сыворотка крови.

РЕАКТИВЫ: 1) Концентрированная серная кислота. 2) Фосфорнованилиновая смесь (4 части фосфорной кислоты и 1 часть 0,6%-ного раствора ванилина).

ОБОРУДОВАНИЕ: 1) Сухие пробирки. 2) Пипетки. 3) Водяная баня. 4) ФЭК. 5) Кюветы с толщиной слоя 0,5 см.

ХОД РАБОТЫ

Для гидролиза 0,1 мл (2 капли) сыворотки смешивают с 5 мл серной кислоты (конц.), перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 10 мин. Одновременно готовят контрольный раствор: в пробирке тщательно смешивают 0,1 мл (2 капли) дистиллированной воды и 5 мл конц. серной кислоты и оставляют стоять при комнатной температуре.

После окончания гидролиза колбу с гидролизатом охлаждают до комнатной температуры, отбирают 0,2 мл (4 капли) и добавляют 3 мл фосфорнованилиновой смеси, тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 – 15 мин. Таким же образом смешивают с фосфорнованилиновой смесью контрольный раствор. Интенсивность окрашивания измеряют на ФЭК, длина волны 540 нм.

Количественное содержание липидов рассчитывают по формуле:

С липидов = 38,5  (Д пробы – Д контроля)

Результаты заносят в рабочую тетрадь.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 20.

Тема: «качественная реакция на адреналин и фолликулин».

МАТЕРИАЛ ИССЛЕДОВАНИЯ: раствор адреналина (1:1000).

РЕАКТИВЫ: 1) 1%-ный раствор FeCl₃. 2) 10%-ный раствор NaOH. 3) 10%-ный раствор KIO₃.

4) 10%-ный раствор уксусной кислоты.

ОБОРУДОВАНИЕ: штатив с пробирками, пипетки.

Ход работы.

I. РЕАКЦИЯ С FeCl₃. В пробирку вносят 3 капли раствора адреналина и 1 каплю 1% раствора FeCl₃. Появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое затем при прибавлении 1 капли раствора NaOH приобретает вишнево-красный цвет. Реакция обусловлена тем, что пирокатехиновое ядро образует с ионами Fe⁺³ соединения типа фенолятов.

II. РЕАКЦИЯ НА АДРЕНAЛИН. В пробирку вносят 2-3 капли раствора адреналина, 2 капли раствора KIO₃ и 2 капли раствора уксусной кислоты. Перемешивают и слегка нагревают. Жидкость окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Окраска обусловлена тем, что при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель.

Качественная реакция на фолликулин (эстрон) проводится с H₂SO₄ (конц.) и обусловлена образованием эфирного соединения коричневого цвета.

РЕАКТИВЫ: H₂SO₄ (конц).

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: фолликулин, спиртовой или масленый раствор.

Ход работы.

РЕАКЦИЯ С H₂SO₄ (конц).

Для спиртового раствора фолликулина.

В пробирку наливают 20-30 капель спиртового раствора фолликулина и помещают её в кипящую водяную баню на 5-10 минут для удаления спирта. К оставшемуся в пробирке фолликулину добавляют 0,4 мл (8 капель) H₂SO₄ (конц.) и ставят пробирку вновь в кипящую водяную баню на 5-10 минут. Жидкость в пробирке постепенно приобретает соломенно-желтое окрашивание, переходящее при нагревании в оранжевое.