Ход работы.

Готовят раствор мурексида для всей группы студентов. Для этого в колбу вносят 1 мл раствора NaOH и 100 мл воды, перемешивают. В полученный раствор добавляют смесь мурексида до появления ярко-фиолетовой окраски. Микробюретку заполняют раствором трилона Б. В две широкие пробирки (опытная и контрольная) наливают по 5 мл раствора мурексида. В опытную пробирку вносят по 0,2 мл (4 капли) исследуемой сыворотки крови (раствор становится розовым). Титруют (без промедления!) из микробюретки раствором трилона Б до исчезновения розовой окраски и восстановления фиолетового цвета (сравнить с окраской контроля, титрование лучше делать при дневном освещении).

РАСЧЕТ: Исходя из того, что 1 мл 0,05 моль/л раствора трилона Б эквивалентен 0,06 мг Са, рассчитывают содержание кальция в сыворотке крови (в мг/дл):

Х = В х 0,06 х 100 х 5,

где В – объем трилона Б, пошедший на титрование опытной пробы, мл.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 17.

Тема: «определение сиаловых кислот в сыворотке крови методом гесса».

Метод Гесса колориметрический, основан на цветной реакции, получаемой при нагревании сиаловой кислоты (ацетилнейраминовой) с уксусно-сернокислотным реактивом. Интенсивность буровато-розового окрашивания зависит от концентрации сиаловых кислот.

Исследования сиаловых кислот в крови имеет важное диагностическое значение, особенно при ревматизме, туберкулезе и раке легких, злокачественных опухолях костной ткани, когда содержание их увеличивается.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: Сыворотка крови.

РЕАКТИВЫ: 1) Трихлоруксусная кислота, 10%-ный раствор. 2) Уксусно-сернокислотный реактив (95 частей ледяной уксусной кислоты и 5 частей концентрированной серной кислоты).

ОБОРУДОВАНИЕ: 1) Водяная баня. 2) Фотоэлектроколориметр. 3) Центрифуга, центрифужные пробирки.

ХОД РАБОТЫ.

К 1 мл сыворотке крови в центрифужной пробирке добавляют 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты и встряхивают (при этом образуется осадок). Затем центрифужную пробирку помещают в кипящую водяную баню на 5 минут и охлаждают. Это приводит к освобождению связей N-ацетилнейраминовой кислоты с белковой частью молекулы гликопротеидов. Центрифугируют при 3000 оборотах в минуту 10 минут. После центрифугирования к 0,4 мл (8 капель) надосадочной жидкости добавляют 5 мл уксусно-кислотного реактива и повторно нагревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут. При этом появляется буровато-розовое окрашивание. После охлаждения колориметрируют в фотоэлектроколориметре в кювете 10 мм с зеленым (540) светофильтром по правому барабану. Полученную величину экстинции умножают на 1000. Результат определения выражают в величинах экстинции. В норме величина её (ФЭК) колеблется от 100 до 195, что соответствует содержанию сиаловых кислот от 50 до 79 мг %. Метод прост и быстр, более специфичен, чем дифениламиновый, но малочувствителен.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 16.