Тема: «определение перекиси липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой».

При высокой температуре в кислой среде малоновый диальдегид (МДА) реагирует с 2 тиобарбитуровой кислотой (ТБК), образуя окрашенный триметиновый комплекс, содержащий 1 молекулу МДА и 2 молекулы ТБК, с максимумом поглощения при 535 нм.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: Сыворотка крови.

РЕАКТИВЫ: 1) Ортофосфорная кислота (1%-ый раствор). 2) 2-тиобарбитуровая кислота (0,6%-ный раствор). 3) Железо сернокислое FeSO₄ • 7 H₂O (1 мкмоль в пробе). 4) Бутиловый спирт (бутанол-1, н-бутиловый спирт).

ОБОРУДОВАНИЕ: 1) Пробирки центрифужные. 2) Прибор для отсасывания верхней фазы 1 шт.

Ход работы.

К 0,3 мл (6 капель) сыворотки приливают 3 мл 1%-ного раствора ортофосфорной кислоты, добавляют 1 мл 0,6%-ного раствора ТБК и 0,1 мл (2 капли) раствора сернокислого железа. Перемешивают. Пробирки закрывают пробкой, ставят в кипящую водяную баню на 1 час.

Затем пробирки охлаждают в холодной воде, добавляют 4 мл бутанола, тщательно перемешивают и центрифугируют 10 минут при 3000 оборотах в минуту. Измеряют оптическую плотность верхней фазы при длине волны 535 нм (Еоп) против бутанола.

Расчет содержания продуктов (МДА), реагирующих с ТБК, проводят по формуле:

Еоп  10⁶  4 мл

А = —————————————————— = Еоп  85,47 мкмоль/л,

1,56  10⁵ (л/моль  см)  1 см  0,3 мл

где А – содержание МДА в мкмоль/л;

4 мл – объём бутанольной фазы;

0,3 мл – объём сыворотки;

1,56  10⁵ л/моль  см – коэффициент молярной экстинции МДА;

1 см – толщина слоя кюветы;

10⁶ - коэффициент перевода моль в мкмоль.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 19.

Тема: «ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

(Метод мойдина и зака)».

Метод основан на способности органических соединений – комплексонов – взаимодействовать с ионами кальция. В качестве комплексона используется трилон Б (ЭДТА). Трилоном Б титруют ионы кальция, предварительно связанные с индикатором – мурексидом. Момент полного связывания кальция с трилоном Б определяется по изменению цвета мурексида (в комплексе с ионами кальция мурексид красно-оранжевого цвета, свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет). Комплекс кальция с трилоном Б более прочен, чем комплекс с мурексидом. Зная концентрацию и объем раствора трилона Б, пошедшего на титрование, находят содержание кальция. Нормальное содержание кальция в сыворотке крови 9-11 мг/дл (2,25-2,64 ммоль/л). Состояние гипокальциемии наблюдается при авитаминозе Д (рахите), у беременных, при недостаточной функции паращитовидной железы, заболеваниях почек, при отравлениях фторидами. Гиперкальциемия встречается реже (гиперпаратиреодизм, опухоли, деструктивные процессы в костной ткани, лейкозы).

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: сыворотка крови.

РЕАКТИВЫ: 1) NaOH, 30%-ный раствор. 2) Трилон Б, 0,05 моль/л раствор. 3) Индикатор (смесь мурексида с хлоридом натрия в соотношении 1:100).

ОБОРУДОВАНИЕ: 1) Колбы вместимостью 100 мл. 2) Цилиндры мерные вместимостью 100 мл.

3) Пробирки. 4) Бюретки.