3. Знать пределы физиологических колебаний биохимических показа­те­лей:

общий холестерин, ß-липопротеины (ЛПНП) крови;

4. Знать и уметь объяснять значения терминов: гиперхолестеринемия,

гипохолестеринемия, гиперлипопротеинемия, гиполипопротеинемия,

дислипопротеинемия, липотропные факторы, липоидозы

Этапы проведения занятия:

1.Вводная часть

2. Основная часть занятия: лабораторная работа

(общие и индивидуальные задания для СДС)

3.Заключительная часть занятия (тест-контроль)

Ориентировочная основа деятельности студентов (ООД) для проведения лабораторной работы:

Работа №1. Определение общего холестерина крови ферментативным методом

Принцип метода. Определение холестерина основано на использовании сопряженных ферментативных реакций, катализируемых холестеролэстеразой, осуществляющей гидролиз эфиров холестерина до свободного холестерина; холестеролоксидазой, осуществляющей превращение холестерина в холестенон с образованием Н₂О₂; пероксидазой, осуществляющей окисление перекисью 4-аминоантипирина и фенола с образованием окрашенного продукта розово-малинового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации холестерина.

Реактивы:

А) Рабочий реагент - смесь лиофильно высушенных ферментов, буферного раствора, фенола, аминоантипирина

Б) Калибратор – калибровочный раствор холестерина 4,65 ммоль/л

Порядок выполнения работы:

1. По 1 мл рабочего реагента наливают в пробирку №1 (опыт) и

пробирку №2 (калибровочная проба), затем прогревают 5 минут при 37⁰ С

2. В пробирку №1 (опыт) добавляют 0,01 мл сыворотки крови,

в пробирку №2 (калибр. проба) - 0,01 мл калибратора

3. Пробирки выдерживают 20 минут в термостате при 37⁰ С

4. Измеряют оптическую плотность растворов на ФЭКе против Н₂О при длине

волны 490 нм в кювете 0,3 см

5. Расчет проводят по формуле: х = (А_опыт : А_калибр.) × 4,65 ммоль/л,

где А – оптическая плотность растворов (показания ФЭКа)

Уровень холестерина в норме (сыворотка) – 3,63 - 8,03 ммоль/л

рекомендуемые пределы (желательные) для взрослых - < 5 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение. Гиперхолестеринемия – увеличение холестерина в крови, сопровождает гиперлипопротеинемии IIA, IIB, III типов; заболевания печени, холестаз, нефротический синдром, злокачественные опухоли поджелудочной железы и простаты, сахарный диабет и другие заболевания. Гиперхолестеринемия является фактором риска развития атеросклероза и одним их биохимических тестов патологии. Гипохолестеринемия наблюдается при болезнях печени (цирроз в поздней стадии заболевания, острая дистрофия печени), голодании, сепсисе, гиперфункции щитовидной железы и др.

Работа №2. Количественное определение липопротеинов низкой плотности

(ß-ЛП, ЛПНП) в сыворотке крови

Принцип метода: в основу метода положена способность ЛПНП осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора (гепарин способен образовывать с ЛПНП комплекс, который в присутствии хлорида кальция выпадает в осадок). По степени помутнения раствора и судят о концентрации ЛПНП в сыворотке крови.

Порядок выполнения работ:

1. В пробирку вносят 2 мл 0,27% раствора Cacl₂ и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают.

2. Определяют оптическую плотность раствора (А₁) против Н₂О при длине волны 630 нм в кювете 0,5 см.

3. Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют 0,04 мл (2 капли) 1% раствора гепарина, перемешивают.

4. Ровно через 4 минуты снова определяют оптическую плотность раствора (А₂) в тех же условиях.

5. Расчет проводят по формуле: х = (А₂ – А₁)×100

В норме содержание ЛПНП (ß-ЛП) в сыворотке крови составляет 3 – 4,5 г/л (300-450 мг в 100 мл). Среднее содержание холестерина в ЛПНП составляет 40-50%

Клинико-диагностическое значение. Дислипопротеинемия – нарушение физиологического соотношения классов липопротеинов с повышением содержания определенного класса. Гиперлипопротеинемия – повышение концентрации в крови определенных классов липопротеинов, чаще всего - атерогенных (ЛПНП, ЛПОНП). Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеросклерозе, холестазе, острых гепатитах, диабете, ожирении и др.