Экспрессия эукариотных генов

Проводится после неограниченного клонирования.

Экспрессия введенного гена – это способ заставить ген работать в бактериальной клетке. Состоит из 2 этапов:

Транскрипция. Если фрагмент введенной DNK содержит ген, включающий также регуляторную часть, то можно ожидать, что транскрипция возможна, но для генов эукариот это маловероятно т. к. в бактериях нет регуляторных белков, которые способны включать эукариотичные гены. Поэому необходимо удалить весь регуляторный участок эукариотичного гена и заменить его на регуляторный участок гена бактерии или разрезать бактериальную DNK на границе гена и промотора и вставляют туда ген эукариотичного гена.

Трансляция. Этот процесс идет с участием рибосом, которые отличаются от бактериальных начальным участком, ответственным за прикрепление к хромосоме. Поэтому ген эукариот встраивают после того участка бактериального гена, который важен для начала транскрипции.

Еще одно препятствие: бактерии не способны к сплайсингу (вырезание молчащих участков DNK). Поэтому используют кDNK (копию), уже прошедшую созревание.

Для экспрессии эукариотичных генов в бактериях также используют экспрессионные вектора, имеющие сильный промотор, подходящий сайт для клонирования и терминационный кодон.

Векторы Ампликоны – экспрессионный вектор, который содержит все элементы, необходимые для экспрессии, включая чужеродные и селективные гены.

Т.о., используются различные штаммы микроорганизмов, в которых функционируют гены различного происхождения, производящие нужные продукты. Это позволяет наладить производство на базе генно-инженерных штаммов производство рекомбинантных белков – биопродукции второго поколения.