Работа 5. Определение резус-принадлежности

Применяют набор двух видов цоликлонов: анти-D Супер (выявляет полные антитела при определении резус-принадлежности в реакции агглютинации на плоскости) и анти-D (выявляет неполные антитела при определении резус-совместимости в реакции конагглютинации с желатином или в реакции Кумбса). Цоликлон анти-D позволяет выявлять слабые формы антигена D(u), в связи с чем позволяет типировать доноров (но не реципиентов), которые не дают агглютинации с реагентом анти-D, как резус-отрицательные. Доноры, имеющие D(u) - считаются резус-положительными, так как переливание их крови Rh-отрицательным реципиентам может вести к сенсибилизации, а у сенсибилизированных по резус-фактору лиц вызывать тяжёлые трансфузионные реакции.

Все реципиенты, не дающие агглютинации с реагентом анти-D Супер, а также вызывающие агглютинацию с анти-D, считаются резус-отрицательными и им можно переливать только резус-отрицательную кровь, так как нормальный антиген-D может приводить к сенcибилизации пациента с развитием резус-конфликта, как у Rh-отрицательных лиц.

1. Реакция агглютинации на плоскости с помощью цоликлона анти-d Супер (содержащего полные IgМ антитела)

Ход работы. Определение проводят в помещении с хорошим освещением. Планшетку подогревают при температуре 37^оС. Затем наносят на неё большую каплю (0,1 мл) цоликлона, а рядом каплю (0,03 мл) крови и перемешивают их стеклянной палочкой. После, мягко покачивая, наблюдают за реакцией. Чёткая агглютинация наблюдается через 30 с, результат реакции фиксируется через 3 мин после смешивания крови и реагента.

Рекомендации к оформлению работы. При визуальной оценке выраженность агглютинации в результатах отмечается:

++++  крупнодисперсная,

+++  среднедисперсная,

++  мелкодисперсная,

+  сомнительная,

-  отсутствует.

В анализе объясните полученные результаты, если агглютинация выражена слабо, значит в эритроцитах есть какой-то слабый антиген из резус- D(u) и тогда необходимо повторить исследование с реагентом, содержащим IgG (неполные) анти-D антитела.

2. Реакция агглютинации в присутствии высокомолекулярных субстанций с помощью цоликлона анти-д

А. Реакция агглютинации на плоскости при участии цоликлона анти-Д Эта реакция проводится также как в пункте 1, только ещё проводится контрольная проба с раствором высокомолекулярного вещества (альбумина или полиглюкина). Если эти вещества вызывают сами по себе агглютинацию, то результаты недостоверны.

Б. Реакция конагглютинации в присутствии желатина

Ход работы. В пробирку помещают 0,05 мл исследуемой крови и добавляют 2 капли (0,1мл) 10% раствора желатина, предварительно подогретого на спиртовке до жидкого состояния, затем ещё 2 капли (0,1мл) реагента анти-D. Смешивают, помещают пробирку в водяную баню при температуре 37^оС на 10 минут.

После инкубации доливают в пробирку 5-8 мл физиологического раствора и, осторожно переворачивая 1-2 раза, перемешивают содержимое пробирки. Оценка агглютинации производится на свет невооружённым глазом или с лупой. Эту пробу проводят с параллельным контрольным определением:

1  со стандартными Rh⁺ эритроцитами,

2  со стандартными Rh^- эритроцитами,

3  с исследуемыми эритроцитами и желатином без анти-D антител.

Рекомендации к оформлению работы. Если в пробирке нет агрегатов, а видна равномерно окрашенная взвесью эритроцитов жидкость, кровь является резус-отрицательной, при резус-положительной крови наблюдаются четко различимые агрегаты различной величины. Результаты пробы считаются достоверными, если желатин не вызывает агглютинацию, а результаты других контрольных проб соответствуют ожидаемым. Если же желатин вызывает агглютинацию сам по себе, следует предположить наличие антиэритроцитарных антител анти-Rh или другой специфичности, что может быть при гемолитической болезни новорожденных, аутоиммунной гемолитической анемии и некоторых инфекционных заболеваниях. В этих случаях кровь направляется в серологическую лабораторию. При мелкозернистой (сомнительной) агглютинации требуется дальнейшее дополнительное исследование.

Занятие 4

СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ

Цель занятия. Проанализировать механизмы свертывания крови и фибринолиза. Познакомиться с основными экспресс-методами их исследования.