Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
окон. пос СЯ Амиреев.doc
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.03.2025
Размер:
13.06 Mб
Скачать

Посев на питательные среды

Доставленный на исследование материал может быть загрязненный и незагрязненный посторонней микрофлорой. Незагрязненный посторонней флорой патологический материал от больного (кровь, спинномозговая жидкость, экссудат) сразу засевают на питательные среды (МПА, МПБ, агар Хоттингера и бульон Хоттингера). Одновременно материал засевают на дифференциально-диагностическую среду с 0,01 % фенолфталеин фосфатом натрия. Загрязненный посторонней микрофлорой материал после приготовления мазков для микроскопии (трупный материал – кусочки органов и т.д.) делят на две части. Одну часть перед исследованием прогревают (гретая проба), другая часть исследуется без предварительного прогревания (негретая проба). Негретая проба. Пробу фильтруют в фильтре Зейтца через мелипоровские мембраны № 3. Осадок с каждого фильтра смывают 10 -12 мл 0,9% раствора хлорида натрия и используют для микроскопии, посева на питательные среды: агар Хоттингера, дифференциально-диагностический агар (далее – ДДС-агар) и заражения белых мышей. Гретая проба. Вторую часть пробы прогревают на водяной бане при температуре +800С – 5-10 минут или +560С – 30 минут фильтруют через одну, две фильтровальные мелипоровские мембраны № 3 в фильтре Зейтца. Осадок с каждого фильтра смывают 10-12 мл 0,9% раствора хлорида натрия и проводят посев на агар Хоттингера, ДДС-агар и заражения белых мышей. При отсутствии фильтровальных мембран негретые и гретые смывы можно центрифугировать 15 минут при 3000 оборотов в минуту, надосадочную жидкость удаляют, а из осадка делают посевы на агар Хоттингера, ДДС-агар, заражают белых мышей. Исследование проб можно проводить без фильтрации и центрифугирования. На агаровые пластинки с питательной средой посев материала проводят бактериологической петлей с переносом (две чашки) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют 18-24 часа при температуре +371оС и при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 часов. На плотных питательных средах при просмотре под малым увеличением микроскопа (в 10-60 раз) возбудитель сибирской язвы имеет вид плоских матово-серых шероховатых (R-форма) колоний. Центр колонии иногда затемнен, периферия бахромчатая с локонообразными отростками, состоящие из сплетений длинных нитей микробов. Встречаются колонии с менее выраженной шероховатостью и без отростков, которые также подлежат дальнейшей идентификации. Культуры, выросшие на дифференциально-диагностической среде, обрабатывают парами аммиака и для дальнейшего исследования отбирают только бесцветные колонии. Из шероховатых колоний, выросших на плотной питательной среде, а также из бесцветных колоний на дифференциально-диагностической среде делают мазки и пересев в МПБ и на МПА для дальнейшей идентификации.

МПБ после суточного роста сибиреязвенного микроба остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок в виде комка ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья. В отдельных случаях в МПБ может появиться диффузный рост культуры (лёгкое помутнение), при встряхивании образуются муаровые волны. Из бульонной культуры делают мазки, окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках из типичной бульонной культуры обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек, из бульонной культуры с диффузным ростом – отдельные или парно расположенные палочки. При получении смешанной культуры, выделение чистой культуры возбудителя сибирской язвы проводят общепринятыми методами (дробный рассев на плотные питательные среды в чашках Петри, отсев отдельных колоний, заражение белых мышей).