Взятие материала от человека

При кожной форме болезни исследованию подлежит содержимое везикул, карбункулов, отделяемое язвы или отторгнутый струп. Перед взятием материала у постели больного нужно осторожно очистить спиртом кожу вокруг пораженного места и поверхность карбункула. Материал берется стерильным тампоном, пипеткой, шприцем. При септической форме берут кровь из вены в объеме 1 мл, мокроту, испражнения, мочу. У умерших берут части пораженных органов, тканей и обязательно кровь и селезенку. Взятый для исследования материал помещают в стерильные банки с притертой или плотно закрывающейся крышкой. Посуду с патологическим материалом помещают в пеналы для транспортировки, опечатывают, этикитируют и направляют в лабораторию с нарочным. На сопроводительной этикетке к патологическому материалу от человека указывают фамилию, имя, отчество больного (умершего), место и время взятия патологического материала, его наименование и предположительный диагноз.

Сроки исследования:

• микроскопического – в день поступления материала;

• бактериологического – до 3 суток;

• биологического – до 10 суток.

Порядок проведения исследования

Лабораторное исследование патологического материала включает: подготовку пробы для исследования (при необходимости), микроскопическое исследование исходного материала, посевы на питательные среды, заражение лабораторных животных, постановку серологических реакций с целью обнаружения антигенов и антител, при необходимости – реакцию преципитации (по Асколи), постановку цепной полимеразной реакции идентификацию выделенных культур.

Подготовка материала от людей и животных для исследования на сибирскую язву. Патологический материал от больного, трупа и сельскохозяйственных животных (струп, кусочки тканей, мясо и органов) помещают в ступку, при необходимости измельчают ножницами, вносят небольшой объем стерильной воды или 0,9% раствор хлорида натрия, тщательно растирают, затем доводят содержимое пробы до получения объема 10-12 мл.

Микроскопическое исследование

Из доставленного патологического материала готовят мазки, фиксируют этиловым спиртом с добавлением перекиси водорода, окрашивают по Граму, люминесцентной сибиреязвенной сывороткой. Мазки из крови, мокроты, трупного материала от людей и животных дополнительно окрашивают по Гинс-Бурри или другим методом для обнаружения капсулы. В мазках, окрашенных по Граму, Bacillus anthracis – прямая грамположительная палочка, молодые и старые культуры могут окрашиваться по Граму отрицательно. В мазках палочки располагаются короткими цепочками или попарно, концы их, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. В отдельных случаях (чаще в мазках от человека или свиней) форма микробов сибирской язвы может быть нехарактерной (короткие толстые или изогнутые, иногда зернистые палочки с вздутием посередине или на конце, возможно наличие «теней» микробов). В мазках из свежего патологического материала, окрашенных специальными методами (по Михину, Гинс-Бурри), сибиреязвенные палочки окружены капсулой. При окраске мазков из несвежего патологического материала микробы могут быть несколько увеличены, концы закруглены, морфологическая стройность бацилл нарушена, они как бы изъедены, иногда остаются «тени», а от капсул могут оставаться одни обрывки, которые окрашиваются очень слабо. Окрашивание препаратов люминесцирующими сыворотками проводят в соответствии с наставлением по их применению. Обнаружение в мазке специфического свечения позволяет подозревать наличие в исследуемой пробе возбудителя сибирской язвы. Результаты иммунофлюоресцентного анализа (далее – МФА) считаются положительными, если в препарате (мазке) обнаруживаются хотя бы единичные морфологически типичные микроорганизмы специфически флюоресцирующие на 3-4 креста в нескольких полях зрения (просмотр не менее 20 полей) при отрицательном контроле с гетерологичным тест-штаммом. По результатам микроскопического исследования немедленно дают предварительный ответ.