3.3.2. Реакция гемолиза

Механизм гемолиза аналогичен механизму бактериолиза.

Испо­льзуемые в реакции эритроциты являются антигеном. Источником ан­тител является антиэритроцитарная сыворотка (например, если в реакции применяются бараньи эритроциты, то необходимую сыворотку со специфическими антиэритроцитарными антителами получают от кро­ликов, иммунизированных бараньими эритроцитами). В качестве комплемента в реакциях лизиса чаще всего используется сыворотка крови морской свинки, так как в ней содержится значительно больше комплемента, чем в сыворотках других животных.

В тех случаях, когда антитела в присутствии комплемента разрушают эритроциты, из них выходит гемоглобин, и реагирующая смесь из мутной взвеси эритроцитов превращается в прозрачную красную жидкость (лаковая кровь). Такую реакцию называют гемолизом. В лабораторной практике она применяется в качестве пока­зателя адсорбции комплемента в реакции связывания комплемента.

3.4. Реакция связывания комплемента

Реакция связывания комплемента (РСК) - специфическое взаимо­действие антигенов с антителами, при котором образуется комплекс, способный адсорбировать на себе комплемент. Учет результатов реакции проводится с помощью гемолитической системы.

Детальные исследования явлений гемолиза и бактериолиза позво­лили Ж.Борде и О.Жангу в 1901 году создать классическую реакцию связывания комплемента, которая, по сути дела, объединяет два этих феномена. Реакция основана на свойстве специфического комплекса антиген-антитело адсорбировать на своей поверхности комплемент. Следовательно, если к образующемуся специфическому комплексу анти­ген-антитело добавить комплемент, то его содержание в среде резко падает, так как он присоединяется к этому комплексу. Однако сформировавшийся комплекс антиген+антитело+комплемент остается неви­димым, Для того, чтобы доказать его образование, Ж.Борде и О.Жангу включили в реакцию гемолитическую систему (смесь равных объемов эритроцитов барана со специфическом антиэритроцитарной сывороткой).

В тех случаях, когда взятые в опыт антигены и антитела гомологичны, они образуют комплекс антиген-антитело, на нем адсорбируется компле­мент. При последующем добавлении гемолитической системы гемолиза эритроцитов не наблюдается (гемолиз происходит только в присутствии комплемента). На дне пробирки образуется осадок негемолизированных эритроцитов. Если же исследуемый бактериальный антиген и антитело гетерологичны, комплемент остается несвязанным, и при добавлении гемолитической системы он адсорбируется на втором комплексе (эри­троциты и антиэритроцитарная сыворотка) - в результате наступает гемолиз эритроцитов. Процесс гемолиза очень демонстративен: в результате разрушения эритроцитов жидкость окрашивается в ярко-крас­ный цвет, следовательно, если гемолиз отсутствует, результат РСК оценивает­ся как положительный, то есть исследуемые антитела соответствуют взятым в опыт антигенам).

Таким образом, РСК по механизму действия является более слож­ной по сравнению с другими серологическими реакциями. В ней задей­ствованы две системы антиген-антитело: основной комплекс представ­лен бактериальным антигеном и соответствующими антителами; второй комплекс состоит из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки. Он вводится в реакцию как индикаторная система. Обязательно присутствие комплемента.

РСК может быть применена:

а) для установления наличия в исследуемой сыворотке антител при помощи использования известного антигена-диагностикума;

б) для обнаружения и определения вида неизвестного антигена с использованием известной иммунной диагностической сыворотки.

РСК отличается высокой специфичностью, чувствительностью, она широко применяется в целях диагностики многих инфекционных заболеваний, а также при проведении различных научных исследова­ний. Тем не менее, она обладает рядом особенностей, которые огра­ничивают ее применение. Так, в реакции участвуют 5 компонентов, которые должны использоваться в строго определенных количествах, что создает определенные технические трудности и обусловливает продолжительность проводимых исследований. Кроме того, потребность в свежих эритроцитах ставит лаборатории перед необходимостью со­держания вивария с баранами.