- •Оглавление
- •Предисловие
- •Методические указания
- •1. Питательные среды, применяемые в бактериологической практике
- •1.1. Требования, предъявляемые к питательным средам
- •1.2. Классификация питательных сред
- •1.3. Условия культивирования микроорганизмов
- •Распределение бактерий в зависимости от требований к условиям культивирования
- •2. Основы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний
- •2.1. Техника сбора патологического материала от больного для бактериологического исследования
- •Взятие крови.
- •Взятие спинномозговой жидкости
- •Взятие желчи
- •Взятие мочи
- •Взятие отделяемого дыхательных путей
- •Взятие отделяемого открытых инфицированных ран
- •Взятие отделяемого глаз
- •Взятие отделяемого женских половых органов
- •Взятие материалов при аутопсии
- •Взятие рвотных масс
- •Взятие промывных вод желудка
- •Взятие испражнений
- •Сопроводительный документ (направление)
- •2.2. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней
- •2.2.1. Бактериоскопический (микроскопический) метод
- •2.2.2. Бактериологический метод
- •2.2.3. Биологический метод
- •2.2.4. Серологический метод исследования
- •2.2.5. Аллергологический метод
- •3. Серологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний
- •3.1. Реакция агглютинации
- •3.1.1. Ориентировочная реакция на стекле
- •3.1.2. Развернутая (пробирочная) реакция агглютинации
- •3.1.3. Реакция непрямой гемагглютинации
- •3.1.4. Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест)
- •3.2. Реакция преципитации
- •3.2.1. Реакция преципитации с разведённым антигеном
- •3.2.2. Реакция кольцепреципитации
- •3.2.3. Иммунодиффузия по Оухтерлони
- •3.2.4. Иммуноэлектрофорез
- •3.2.5. Реакция флоккуляции
- •3.2.6. Реакция нейтрализации
- •3.3. Реакции лизиса
- •3.3.1. Реакция бактериолиза
- •3.3.2. Реакция гемолиза
- •3.4. Реакция связывания комплемента
- •3.5. Реакции с меченными компонентами
- •3.5.1. Иммунофлюоресцентные методы
- •Реакция прямой иммунофлюоресценции
- •Непрямой иммунофлюоресцентный метод
- •3.5.2. Иммуноферментный анализ
- •Прямой метод ифа
- •Непрямой метод ифа
- •3.5.3. Радиоиммунный анализ
- •3.6. Иммуноблотинг
- •4. Химиотерапевтические препараты. Антибиотики
- •4.1. Требования, предъявляемые к химиотерапевтическим препаратам. Химиотерапевтический индекс
- •4.2. Основные группы химиотерапевтических препаратов
- •4.3. Антибиотики
- •4.3.1. Основные этапы получения антибиотиков
- •4.3.2. Классификация антибиотиков
- •Классификация антибиотиков
- •4.3.3. Антибиотикорезистентность Причины формирования антибиотикорезистентности
- •4.3.4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- •4.3.5. Осложнения и побочные действия антибиотиков
- •4.3.6. Основные причины неэффективности антибиотикотерапии
- •5. Учение об инфекции и иммунитете
- •5.1. Факторы патогенности бактерий
- •Сравнительная характеристика экзо- и эндотоксинов
- •5.2. Инфекционные свойства вирусов
- •5.3. Особенности вирусных инфекций
- •5.4 Невосприимчивость организма к инфекционным агентам
- •5.5. Иммунокомпетентные клетки
- •5.6. Формы иммунного ответа
- •5.6.1. Иммунный ответ по гуморальному типу
- •Динамика образования антител
- •5.6.2 Иммунный ответ по клеточному типу
- •5.6.3. Иммунологическая толерантность
- •6. Биологические препараты для профилактики, лечения и диагностики инфекционных заболеваний
- •6.1. Краткая квалификационная характеристика биологически активных препаратов
- •6.1.1. Лечебно-профилактические препараты
- •6.1.2. Диагностические препараты
- •6.2.1. Вакцины
- •6.3.1. Иммунные сыворотки Сыворотка противодифтерийная
- •Антитоксичная противостолбнячная сыворотка лошадиная
- •Сыворотки противоботулинические типов а,в,с,е,f
- •Антитоксическая противогангренозная поливалентная сыворотка
- •6.3.2. Иммуноглобулины
- •Гамма – глобулин противолептоспирозный
- •Стафилококковый бактериофаг жидкий
- •7.7.1. Антигенные препараты
- •Антиген аденовирусный для рск
- •Стрептолизин–о, сухой
- •6.7.3. Бактериофаги
- •Бактериофаги стафилококковые типовые диагностические сухие ( международный набор, Англия )
- •6.7.4. Бактериальные аллергены
- •6.7.5. Дополнительные диагностические препараты
- •7.2. Инфекция и иммунитет
- •7.3. Частная микробиология
- •1.4. Частная вирусология
- •7.5. Принцип и образец построения экзаменационного билета
- •Образец билета
- •7.6. Планы ответа студентов по некоторым разделам
- •7.6.1. Схема ответа по частной микробиологии
- •7.6.2. Схема ответа по биологически-активным препаратам
- •Заключение
3.2.6. Реакция нейтрализации
Реакция применяется при диагностике пищевых бактериальных отравлениях для определения в исследуемом материале бактериальных токсинов. Кроме того, ее можно ставить при исследовании некоторых объектов внешней среды на содержание патогенных бактерий, продуцирующих токсины, например, при исследовании почвы на наличие возбудителей столбняка или газовой гангрены. Известно, что токсин в смеси с гомологической антитоксической сывороткой не проявляет своего токсического действия, так как токсин нейтрализуется. Реакция взаимодействия токсина с антитоксином, как правило, строго специфична, поэтому для постановки реакции нейтрализации с целью определения типа токсина необходимо иметь диагностические сыворотки, специфические к каждому виду и типу токсина. Можно применять одновременно применять смесь 2-3 антитоксических сывороток и более, если предполагается наличие в исследуемом материале несколько токсинов.
Реакция нейтрализации позволяет определить вид и тип токсина возбудителя. Исследуемым материалом может быть фильтрат пищевых продуктов, предположительно вызвавших отравление, смывы с посуды, где находились эти продукты и др. Предварительно проводится нейтрализация предполагаемого токсина. Для этого в пробирку с исследуемым материалом ( опытная пробирка ) добавляется антитоксическая диагностическая сыворотка (она содержит антитела к искомому токсину); в другую пробирку (контрольную) доливается равный объем физиологического раствора. После кратковременной инкубации содержимое пробирок вводится двум группам белых мышей (опытной и контрольной).
Результаты реакции нейтрализации учитывают сразу же после гибели контрольных животных. В таком случае факт выживания животных, получивших антитоксическую сыворотку вместе с исследуемым материалом, указывает на наличие в нем токсина, соответствующего вводимой сыворотке.
Достоинством реакции нейтрализации является высокая достоверность получаемых результатов. Однако по своей чувствительности и быстроте получения ответа она уступает некоторым другим методам исследования.
3.3. Реакции лизиса
Реакциями лизиса принято называть растворение корпускулярных антигенов под действием антител, специфичных в отношении данного антигена, в присутствии комплемента. Из иммунных реакций, основанных на феномене лизиса бактерий и других корпускулярных антигенов, применяются, главным образом, реакции бактериолиза и гемолиза.
3.3.1. Реакция бактериолиза
Реакция происходит как in vitro, так и in vivo. Последняя известна под названием реакции В.И. Исаева – Пфейффера. Этими учеными показано, что если морских свинок предварительно проиммунизировать холерными антигенами, то последующее введение им в брюшную полость высоковирулентной культуры холерного вибриона не вызывает заражения животных, так как в брюшной полости происходит растворение возбудителя под воздействием специфических антител.
В дальнейшем И. И. Мечников доказал, что аналогичное растворение холерного вибриона под воздействием иммунной сыворотки происходит и в пробирке, если к основным компонентам добавить свежую сыворотку - источник комплемента. Растворение бактерий под действием специфических антител в присутствии комплемента получило название реакции бактериолиза. При постановке реакции бактериолиза сначала готовят ряд 10-кратных разведений исследуемой сыворотки. Затем в каждую пробирку добавляют одинаковое количество (по 1-2 капли) микробной взвеси. К смеси добавляют комплемент. После инкубирования при 37 °С из каждой пробирки делается высев смеси на питательную среду для установления наличия или отсутствия жизнеспособных бактерий.
Реакцию можно применять для определения антител с помощью известного микроорганизма или для определения вида микробов с помощью диагностической иммунной сыворотки. В практической работе бактериологов эта реакция применяется редко, главным образом, для дифференциации холерных и холероподобных вибрионов.