- •Оглавление
- •Предисловие
- •Методические указания
- •1. Питательные среды, применяемые в бактериологической практике
- •1.1. Требования, предъявляемые к питательным средам
- •1.2. Классификация питательных сред
- •1.3. Условия культивирования микроорганизмов
- •Распределение бактерий в зависимости от требований к условиям культивирования
- •2. Основы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний
- •2.1. Техника сбора патологического материала от больного для бактериологического исследования
- •Взятие крови.
- •Взятие спинномозговой жидкости
- •Взятие желчи
- •Взятие мочи
- •Взятие отделяемого дыхательных путей
- •Взятие отделяемого открытых инфицированных ран
- •Взятие отделяемого глаз
- •Взятие отделяемого женских половых органов
- •Взятие материалов при аутопсии
- •Взятие рвотных масс
- •Взятие промывных вод желудка
- •Взятие испражнений
- •Сопроводительный документ (направление)
- •2.2. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней
- •2.2.1. Бактериоскопический (микроскопический) метод
- •2.2.2. Бактериологический метод
- •2.2.3. Биологический метод
- •2.2.4. Серологический метод исследования
- •2.2.5. Аллергологический метод
- •3. Серологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний
- •3.1. Реакция агглютинации
- •3.1.1. Ориентировочная реакция на стекле
- •3.1.2. Развернутая (пробирочная) реакция агглютинации
- •3.1.3. Реакция непрямой гемагглютинации
- •3.1.4. Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест)
- •3.2. Реакция преципитации
- •3.2.1. Реакция преципитации с разведённым антигеном
- •3.2.2. Реакция кольцепреципитации
- •3.2.3. Иммунодиффузия по Оухтерлони
- •3.2.4. Иммуноэлектрофорез
- •3.2.5. Реакция флоккуляции
- •3.2.6. Реакция нейтрализации
- •3.3. Реакции лизиса
- •3.3.1. Реакция бактериолиза
- •3.3.2. Реакция гемолиза
- •3.4. Реакция связывания комплемента
- •3.5. Реакции с меченными компонентами
- •3.5.1. Иммунофлюоресцентные методы
- •Реакция прямой иммунофлюоресценции
- •Непрямой иммунофлюоресцентный метод
- •3.5.2. Иммуноферментный анализ
- •Прямой метод ифа
- •Непрямой метод ифа
- •3.5.3. Радиоиммунный анализ
- •3.6. Иммуноблотинг
- •4. Химиотерапевтические препараты. Антибиотики
- •4.1. Требования, предъявляемые к химиотерапевтическим препаратам. Химиотерапевтический индекс
- •4.2. Основные группы химиотерапевтических препаратов
- •4.3. Антибиотики
- •4.3.1. Основные этапы получения антибиотиков
- •4.3.2. Классификация антибиотиков
- •Классификация антибиотиков
- •4.3.3. Антибиотикорезистентность Причины формирования антибиотикорезистентности
- •4.3.4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- •4.3.5. Осложнения и побочные действия антибиотиков
- •4.3.6. Основные причины неэффективности антибиотикотерапии
- •5. Учение об инфекции и иммунитете
- •5.1. Факторы патогенности бактерий
- •Сравнительная характеристика экзо- и эндотоксинов
- •5.2. Инфекционные свойства вирусов
- •5.3. Особенности вирусных инфекций
- •5.4 Невосприимчивость организма к инфекционным агентам
- •5.5. Иммунокомпетентные клетки
- •5.6. Формы иммунного ответа
- •5.6.1. Иммунный ответ по гуморальному типу
- •Динамика образования антител
- •5.6.2 Иммунный ответ по клеточному типу
- •5.6.3. Иммунологическая толерантность
- •6. Биологические препараты для профилактики, лечения и диагностики инфекционных заболеваний
- •6.1. Краткая квалификационная характеристика биологически активных препаратов
- •6.1.1. Лечебно-профилактические препараты
- •6.1.2. Диагностические препараты
- •6.2.1. Вакцины
- •6.3.1. Иммунные сыворотки Сыворотка противодифтерийная
- •Антитоксичная противостолбнячная сыворотка лошадиная
- •Сыворотки противоботулинические типов а,в,с,е,f
- •Антитоксическая противогангренозная поливалентная сыворотка
- •6.3.2. Иммуноглобулины
- •Гамма – глобулин противолептоспирозный
- •Стафилококковый бактериофаг жидкий
- •7.7.1. Антигенные препараты
- •Антиген аденовирусный для рск
- •Стрептолизин–о, сухой
- •6.7.3. Бактериофаги
- •Бактериофаги стафилококковые типовые диагностические сухие ( международный набор, Англия )
- •6.7.4. Бактериальные аллергены
- •6.7.5. Дополнительные диагностические препараты
- •7.2. Инфекция и иммунитет
- •7.3. Частная микробиология
- •1.4. Частная вирусология
- •7.5. Принцип и образец построения экзаменационного билета
- •Образец билета
- •7.6. Планы ответа студентов по некоторым разделам
- •7.6.1. Схема ответа по частной микробиологии
- •7.6.2. Схема ответа по биологически-активным препаратам
- •Заключение
3.1. Реакция агглютинации
Реакция агглютинации (РА) – специфическое взаимодействие антигенов с антителами, выражающееся в склеивании антигенов под воздействием антител сыворотки и выпадении их в осадок в присутствии электролита. Была первой из предложенных серологических реакций.
Особенность реакции агглютинации состоит в том, что в качестве антигенов при её постановке используются клетки или другие корпускулярные частицы. Реакция основана на способности корпускулярных антигенов специфически соединяться, с гомологичными антителами иммунных сывороток с образованием осадка в виде зерен, хлопьев, комочков. Реакция проходит только в присутствии электролитов. Антигены, применяемые в реакции, называются агглютиногенами, антитела – агглютининами, а образующийся осадок – агглютинатом.
В качестве антигена в реакции агглютинации можно применять взвесь живых культур в изотоническом растворе хлорида натрия или микробы, убитые формалином, спиртом или прогреванием, а также эритроциты, лейкоциты или другие клетки.
Источником антител служит известная агглютинирующая сыворотка, полученная путем иммунизации животных соответствующими антигенами, или сыворотка обследуемого больного.
Существуют разные способы постановки реакции агглютинации. Из них наиболее часто применяются: ориентировочная реакция на стекле, развернутая агглютинация в пробирках, реакции гемагглютинации и непрямой гемагглютинации (РНГА).
3.1.1. Ориентировочная реакция на стекле
Для постановки чаще всего используются стеклянные пластины с гладкой, хорошо обезжиренной поверхностью (можно использовать пластмассовые, фарфоровые и другие). Компоненты: иммунная сыворотка и исследуемый антиген.
При постановке реакции на одну половину стеклянной пластины наносят 1-2 капли физиологического раствора (контроль), на другую – такое же количество иммунной сыворотки (опыт). Микробная культура (или диагностикум) вносится в обе капли и эмульгируется в ней. После этого наблюдают за результатами реакции, слегка покачивая стекло. В положительных случаях агглютинация, как правило, наступает через 2-3 минуты, она проявляется образованием зерен или хлопьев агглютината, а сама жидкость в капле постепенно просветляется. В контроле реакция должна быть отрицательной: сама капля остается гомогенной, в ней сохраняется равномерная мутность.
Реакция агглютинации на стекле применяется для ускоренной ориентировочной сероидентификации в процессе микробиологической диагностики, а также для типирования микроорганизмов.
Несомненным преимуществом ориентировочной агглютинации перед другими методами является простота реакции, доступность, а также возможность получения результатов в максимально короткие сроки. Однако у нее есть и недостатки – она позволяет судить лишь о наличии или отсутствии искомых антигенов или антител, но не дает представления об их количественном содержании.
3.1.2. Развернутая (пробирочная) реакция агглютинации
Реакция ставиться в агглютинационных или обычных пробирках, в которые сначала вносят равные объемы последовательных разведений (1:2; 1:4; 1:8 и т.д.) исследуемой сыворотки в физиологическом растворе. Затем в каждую пробирку добавляют по 2-3 капли стандартного диагностикума. Учет результатов реакции производят после 2 – часового инкубирования при 370С, после чего оцениваются результаты реакции со жгутиковыми антигенами и снова оставляют на 18 – 20 часов при комнатной температуре или в термостате для регистрации реакции с соматическими антигенами. При положительной реакции осадок покрывает все дно пробирки в виде рыхлого слоя, жидкость над осадком в зависимости от выраженности положительной реакции в той или иной степени просветляется. При отрицательной реакции осадок лежит комком на середине дна пробирки, а надосадочная жидкость сохраняет гомогенную мутность.
Степень положительной реакции агглютинации обозначается плюсами (крестами):
4+ - полная агглютинация: большой рыхлый осадок, полное просветление надосадочной жидкости;
3+ - неполная агглютинация: осадок такой же, надосадочная жидкость менее прозрачная (опалесцирующая);
2+ - слабая агглютинация: осадок небольшой, надосадочная жидкость непрозрачная;
+ - следы агглютинации: осадок весьма маленький, надосадочная жидкость непрозрачная;
- - отрицательная реакция: осадка нет, взвесь остается равномерно мутной.
Титром агглютинирующей сыворотки называется наибольшее ее разведение, при котором еще наблюдается феномен агглютинации.
Преимуществом развернутой реакции агглютинации перед ориентировочной является то, что получаемые с ее помощью результаты свидетельствуют не только о наличии в исследуемой сыворотке искомых антител, но дают информацию и о количественном их содержании. О последнем судят по титру выявляемых в реакции антител.
Реакция агглютинации благодаря своей специфичности и простоте постановки получила широкое распространение в микробиологической практике, где применяется с целью серодиагностики многих инфекционных заболеваний: брюшного тифа и паратифов (реакция Видаля), сыпного тифа (реакция Вейля-Феликса), бруцеллеза реакция (Райта) и др. Эта реакция может применяться и с целью сероидентификации выделяемых микроорганизмов.
Кроме классической реакции агглютинации, применяется ее модификации. Из числа модификации заслуживают внимания, в первую очередь, реакция пассивной гемагглютинации.