Определение группы крови при помощи стан­дартных изогемагглютинирующих сывороток и перекрестным методом

Реактивы и оборудование.

• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки О_ав(1), Aв(II), В_а(Ш) и стандартная сыворотка группы AB₀(IV).

• Стандартные эритроциты групп O(I), А (II) и В (III).

• Изотонический раствор NaCl.

• Белые фарфоровые или любые другие белые пластинки со смачиваемой поверхностью.

• Пипетки глазные.

• Стеклянные или пластмассовые палочки для перемешивания капель крови и сыворотки.

Ход исследований. Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре 15—25 °С. Ампулы, флаконы со стандартными сыворотками ставят в штатив с тремя гнездами (или в два штатива при использовании двух серий сыворотки каждой группы). В левые гнезда ставят сыворотку группы О_ав(1), в средние — сыворотку группы Ав(П) и в правые — сыворотку группы B_a(III). В ампулы опускают сухие чистые пипетки. Отдельно ставят сыворотку группы ABo(lV), употребляемую и качестве дополнительного контроля. Этот набор дополняют про­биркой или флаконом с изотоническим раствором NaCl.

Для определения группы крови перекрестным способом, кроме стандартных сывороток, подготавливают также стандартные эритроциты групп O(I), А(П) и В(Ш). Пробирки со стандартными эритроцитами устанавливают в маленький (на три гнезда) штатив в следующем порядке: слева — группы 0(1), и середине — группы А(П) и справа — группы В(Ш). Стандартные эритроциты изготавливаются учреждениями службы крови в консервированном виде.

Для промывания стеклянных, пластмассовых палочек и пипеток подготавливают стаканы с водой и с изотоническим раствором NaCl.

Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток

На левой стороне пластинки надписывают О_ав|анти-(А + В)], в середине Ав (анти-В) и справа В_а (анти-А), на верхнем крае — фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.

Под соответствующим обозначением группы крови на пла­сгинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки соответствующей группы. Если используют стандарт­ные сыворотки двух различных серий каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О_ав |анти-(А + В)], Ав (анти- В), Ва(анти-А).

Сыворотку берут из ампулы пипеткой, которую тотчас же после того, как из нее была выпущена сыворотка, опускают в ту же ампулу с сывороткой, из которой она была взята.

Кровь для исследования берут из места укола мякоти пальца или мочки уха. Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят сухой стеклянной палочкой на пла­стинку, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 paз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается).

Чистой стеклянной палочкой перемешивают каплю крови с сыворогкой группы О_ав [анти-(А + В)] до тех пор, пока смесь не окрасится равномерно в красный цвет. Другой стеклянной палочкой перемешивают следующую каплю крови с сывороткой группы Ав (анти-В), группы В_а (анти-А). При использовании двух серий сывороток так же делают во втором ряду. Можно перемешивать кровь с сывороткой одной и той же палочкой, но в этом случае необходимо после размешивания каждой капли промывать палочку в стакане с водой, затем в физиологическом растворе и насухо ее вытирать.

После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 мин оставляют в покое и снова периодически покачивают.

Наблюдение за ходом реакции проводят не менее 5 мин. Хотя агглютинация начинается в течение первых 10—30 с, наблю­дение следует вести и далее — до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А₂ (II).

По море наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых на­ступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при псриодическом покачивании пластинки до истечения 5 минут.