2 Открыты рамки считывания (регулят и структур белки).

Проникают в различные типы клеток посредством эндоцитоза.. В кислой среде эндосомы вирионы претерпевают конформационные изменения,выходят в цитоплазму. Терминальный участок белка VP1 обладает активностью фосфолипазы и обеспечивает транспорт фирусных частиц через эндолизосому.

Оказавшись в цитоплазме, вирусные частицы транспортируются по микротрубочкам к ядру и проникают через ядерные поры (размер позволяет). В ядре ДНК освобождается от капсида и начинается репликация, она осуществляется ДНК-полимеразой клетки.

Прописная и заглавная буквы на картинке – это участки, комплементарные между собой. Благодаря вторичной структуре мол-лы не нужно никакой затравки, полимераза сразу же может начинать свою работу.

И это называется «самозатравочный механизм». По ходу работы фермента 5 концевая шпилька расплетается и полимераза доходит до 5 конца материнской молекулы, образуется т н репликативная форма 1(РФ1), она в свою очередь служит матрицей для транскрипции и образования вирусспецифических м-РНК при репликации вируса. Если же ферменту не удастся расплести шпильку, то такие структуры фиксируются при инфекции, однако, это абортивный путь репликации.

РФ1 – транскрипция – образование вирусных белков – комплекс функциональных белков парвовируса, которые называются REP, это 4 белка; 2 из них обладают активностями сайтспецифической эндонуклеазы и хеликазы. Они делают точечный разрыв между 125 (длина инвертир повторов 125) и 126 нуклеотидом и освобождают 3 конец материнской цепи. В результате в составе дочерней цепи оказывается фрагмент материнской. Затем клеточный фермент достраивает последовательность генма парвовируса. Такая структура называется репликативная форма 2 (РФ2), которая тоже может служить матрицей для транскрипции. Затем, за счет хеликазной активности бедков REP концы двуцепочечной ДНК вследствие наличия концевых повторов образуют «заячьи уши», и в результате образуются свободные 3 концы, на которых снова путем самозатравки может продолжаться дальнейшая репликация генома парвовируса.

Репликация днк парвовируса (ааv-2)

-Половина дочерних нитей ДНК аденосателлита имеет положительную, а другая – отрицательную полярность.

• Часть материнской молекулы входит в состав дочерней молекулы ДНК.

• Нуклеотидная последовательность концевых повторов у дочерних молекул ДНК отличается от последовательности родительской ДНК.

• Происходит инверсия нуклеотидной последовательности внутри концевого повтора.

• Структура концевой последовательности (инвертированный повтор) сохраняется

• Изменения не затрагивают смысловых нуклеотидных последовательностей (как кодирующих, так и регуляторных) и не влияют на репликацию вируса.

Особенности репликации днк парвовирусов

• Самозатравочный механизм.

• Начинается сразу со стадии элонгации.

• Нет синтеза фрагментов Оказаки и «отстающей» цепи ДНК.

• Инверсии последовательности геномной ДНК в районе концевых повторов, часть исходной ДНК входит в состав дочерней молекулы.

• Весь процесс репликации генома и сборки вирионов происходит в ядре.

• Репликативная форма служит матрицей для транскрипции.

Инициация транскрипции проводится на разных промоторах, а оканчивается всегда в одной точке – котерминальные матричные РНК. Транслируются как сплайсированные рнк, так и рнк, полученные при прямом прочтении генома парвовируса. Промоторы представлены на картинке. С P5 образуются 2 матричные рнк, при непосредственном прочтении генома транслируется белок REP78, послеальтернатив сплайсинга эта РНК становится матрицей для REP68. С P19 – REP52, если рнк сплайсируется – REP48. C P40 – 3 матричных РНК, НО ПОЛНАЯ НУКЛЕОТИДНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ НЕ ИСПОЛЬЗУЕТСЯ как матрица. Образуются матрица для VP1и3-я матрица для трансляции белков VP2, VP3.

По мере накопления белков оболочки однонитевые ДНК начинают выбывать из процесса репликации и упаковываться в вирусные частицы.

У автономных вирусов зависимость от S фазы, поэтому они могут размножаться только в активно делящихся клетках.

Для ассоциированных в отсутствие вируса-помощника, первые реплицироваться не способны, их размножение подавляется собственным белком REP, который является транскрипционным ингибитором у собственного генома, он связывается с ДНК и ингибирует транскрипцию всех промоторов, и в таком состоянии геном аденоассоциированных вирусов может интегрироваться в клетки хозяина. При этом встраивание происходит сайтспецифически в определенный участок 19 хромосомы, REP вдобавок еще распознает сайт и обеспечивает эту интеграцию.

Никаким онкологическим потенциалом не обладают! Однако ,неплохой объект для генной инженерии.

«Активация» происходит при появлении вирусспецифических белков (для аденовируса Е1А), которые являются трансактиваторами транскрипции. Они непосредственно с ДНК парвовируса не взаимодействуют, видимо ,каким-то образом конкурируют с REP.