Задания

1. Проанализируйте, соответствуют ли результаты исследования течению болезни или это ошибка лаборатории и следует повторить анализ.

2. Назовите методы определения ферментов.

3. Расскажите принцип определения АСТ кинетическим ( UV) методом.

4. Дайте понятие об изоферментах.

Эталон ответа к задаче № 18

1. Показатели активности ферментов на 7 день соответствуют течению болезни. При инфаркте миокарда активность КК-МВ повышается в сыворотке крови уже через 3-5часов, АСТ через 6-8 часов после начала приступа. Через сутки нормализуется КК-МВ, на 4 - 5 сутки АСТ, повышенная активность ЛДГ₁ сохраняется до 10-12 дней, Анализ повторять не надо.

2. В настоящее время применяют 3 основные группы методов для определения активности ферментов: а) по конечной точке, основанные на образовании окрашенных соединений с продуктами ферментативной реакции; б) кинетические , основанные на непрерывной регистрации изменяющейся оптической плотности в ходе реакции за определённые промежутки времени; в) иммунологические - с использованием специфических антител.

3. L–аспартат при каталитическом действии АСТ превращается в оксалоацетат, который при каталитическом действии МДГ превращается в L-малат. Коферментом МДГ (малатдегидрогеназы) является восстановленная форма никонамидадениндинуклеотида (НАДН). Скорость окисления НАДН прямо пропорциональна активности АСТ.

4. Изоферменты – группа родственных ферментов, которые катализируют одну и ту же реакцию, но отличаются друг от друга по структуре, молекулярному весу, скорости перемещения в электрическом поле, отношению к активаторам и ингибиторам, по некоторым иммунологическим характеристикам и месту локализации.

Задача № 19

У двух пациентов определяли общий холестерин (ХС) и холестерин в составе липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП). Были получены следующие результаты:

Вид исследования / ФИО	Иванов А.П.	Петров В.Г.
Общий холестерин	8,2 ммоль/л	6,2 ммоль/л
ХС-ЛПВП	1,2 ммоль/л	1,7 ммоль/л

Задания

1. Рассчитайте индекс атерогенности у пациентов.

2. Оцените результаты исследований и риск развития атеросклероза у обоих

пациентов, если их возраст 45 лет.

3. Расскажите принцип ферментативного метода определения общего

холестерина.

4. Назовите требования, предъявляемые к взятию крови для исследования

липидного спектра.

Эталон ответа к задаче № 19

1. ИА = (ХС – ХС-ХСЛПВП) : ХС-ЛПВП

(8,2 – 1,2) : 1,2 = 5,8 – ИА пациента Иванова.

(6,2 – 1,7) : 1,7 = 2,6 – ИА пациента Петрова.

2. У пациента Иванова высокий ИА, поэтому у него высокий риск развития атеросклероза, у пациента Петрова ИА в пределах нормы для его возраста.

3.Эфиры холестерина под действием холестеролэстеразы превращаются в свободный холестерин и жирные кислоты, холестерин под действием холестеролоксидазы превращается в холестенон и перекись водорода, которая под влиянием пероксидазы окисляет аминосодержащий краситель в присутствии фенольного реагента в окрашенный продукт хинонимин. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию холестерина.

4. Кровь для исследования липидного спектра надо брать натощак, после 12-14 часового голодания, обследуемый должен в течение 2-х недель перед исследованием придерживаться обычного режима питания, взятие крови желательно проводить в одном положении пациента (лучше сидя), в качестве антикоагулянта используют ЭДТА, т.к. гепарин влияет на показатели липидного обмена. На результаты исследований влияет также употребление алкоголя. Хранение проб должно быть ограничено по времени.

Задача № 20

Протромбиновое время (ПВ) исследуемой плазмы больного И., принимающего антикоагулянтную терапию – 30 секунд, протромбиновое время контрольной плазмы – 12 секунд. Международный индекс чувствительности тромбопластина (МИЧ) – 1,1

Задания

1. Выразите показатели исследования в виде протромбинового отношения (ПО) и международного нормализованного отношения (МНО) по таблице. Оцените результаты.

2. Расскажите алгоритм определения протромбина по Квику.

3. Расскажите, какую плазму (богатую или бедную тромбрцитами) готовят для проведения этого теста и какую фазу гемокоагуляционного гемостаза характеризует тест «протромбиновое время».

4. Объясните, что должен предпринять лаборант, если во время получения плазмы в центрифуге разбилась пробирка.

Эталон ответа к задаче № 20

1. ПО = ПВ пл. б-го : ПВ конт. пл.; 30 : 12 = 2,5; МНО = ПО^мич Для лиц, принимающих антикоагулянтную терапию МНО должно быть от 2,5 до 4. Для данного больного это норма.

2. Определяют ПВ 100% контрольной плазмы (неразведённой), 50% (разведённой в 2 раза), 25% (разведённой в 4 раза), 12,5% (разведённой в 8 раз); строят оси координат, на оси Х откладывают ПВ, на оси Y - % разведения плазмы, точки пересечения соединяют и получают график зависимости ПВ от степени разведения плазмы. ПВ исследуемой плазмы откладывают на оси Х, восстанавливают перпендикуляр к графику, из точки пересечения с графиком проводят линию параллельную оси Х до пересечения с осью Y, по шкале которой определяют протромбин по Квику в процентах.

3. Бедную тромбоцитами.Тест протромбиновое время характеризует 2 фазу внешнего пути коагуляционного гемостаза и третью его фазу.

4. Необходимо оповестить руководителя лаборатории о нештатной ситуации и зафиксировать случай аварии в специальный журнал. Ликвидацию последствий аварии на центрифуге надо начать через 40 минут, когда осядет аэрозоль. Необходимо обработать центрифугу 3% раствором хлорамина или 5% раствором аламинола или другого дез. средства, применяемого в лаборатории, экспозиция 1 час, затем протереть чистой ветошью.

Задача № 21

При проведении пробы Реберга концентрация креатинина в сыворотке – 80 мкмоль/л, в суточной моче – 8,32 ммоль/л, объём суточной мочи (V) – 1440 мл.

Задания

1. Рассчитайте клубочковую фильтрацию (Ф), канальцевую реабсорбцию (Р) и оцените результаты.

2. Дайте общую характеристику креатинину, объясните, почему о функциональном состоянии почек можно судить по уровню креатинина, а не по другому аналиту.

3. Поясните, с какой целью при определении креатинина в сыворотке в опытную пробу добавляют трихлоруксусную кислоту.

4. Расскажите правила обработки кювет.

Эталон ответа к задаче № 21

1. Ф = С креат. в моче : С креат. в сыв. • Д (минутный диурез),

Д = V : Т (время в минутах). Ф = 8320 : 80 • 1 = 104 (мл/мин) – норма,

Р = (Ф – Д) : Ф • 100%. Р = (104 – 1) : 104 • 100 = 99% - норма.

2. Креатинин – фракция остаточного азота. Он образуется из макроэрга креатинфосфата, после того как последний отдаст часть своей энергии миофибриллам. Креатинин бывает экзогенного (поступает с пищей) и эндогенного (синтезируется в организме) происхождения. Уровень его содержания в крови и моче определяется в основном мышечной массой и выделительной способностью почек.Креатинин – беспороговое вещество, не реабсорбируется и не секретируется в почечных канальцах, поэтому параллельное определение креатинина в крови и в моче позволяет оценивать функциональное состояние почек, а именно фильтрацию и реабсорбцию.

3. Трихлоруксусную кислоту добавляют с целью депротеинирования и удаления белков, так как белки мешают определению креатинина.

4. Кюветы замачивают в перекиси водорода 6%, экспозиция 1 час, промывают многократно проточной водой и ополаскивают несколько раз дистиллированной водой и сушат на воздухе.

Задача № 22

Активность альфа–амилазы больного К. в динамике, поступившего в больницу с приступом острого панкреатита следующая:

Время определения активности альфа-амилазы от начала болевого приступа	Активность альфа–амилазы сыворотки	Активность альфа– амилазы мочи
Через 8 часов	гиперамилаземия	гиперамилазурия
Через 12 часов	гиперамилаземия	норма
Через 24 часа	гиперамилаземия	гиперамилазурия
Через 3 суток	норма	гиперамилазурия
Через 5 суток	норма	норма

Задания

1. Обнаружьте, в каком из определений существует лабораторная ошибка. Ответ поясните.

2. Расскажите принцип определения альфа – амилазы методом Каравея.

3. Назовите особенности постановки контроля данного метода.

4. Расскажите правила обеззараживания мочи.

Эталон ответа к задаче № 22

1. Лабораторная ошибка присутствует в первом исследовании, так как активность альфа-амилазы в сыворотке увеличивается значительно раньше, чем активность альфа-амилазы в моче с момента болевого приступа.Гиперамилазурия наступает через 24 часа от начала болевого приступа и длится дольше, чем гиперамилаземия.

2. Метод базируется на колориметрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза с участием альфа-амилазы.

3. Контрольную пробу ставят на каждую сыворотку и мочу, биоматериал вносят в контрольные пробы только после добавления ингибитора и остановки ферментативной реакции.

4. Мочу засыпают сухой хлорной известью в соотношении 5:1, экспозиция 1 час, затем выливают в канализацию.

Задача № 23

Для ведения внутрилабораторного контроля качества была проделана установочная серия с контрольной сывороткой «HUMATROL» для всех определяемых аналитов. По результатам установочной серии составили карту Шухарта для общего белка: Х средняя – 68 г/л, среднеквадратическое отклонение (S) – 2г/л. Результаты последующих исследований общего белка в контрольной сыворотке той же серии ежедневно наносились на карту Шухарта.

Дата	04.02.04	05.02.04	06.02.04	07.02.04	08.02.04
Концентрация «ОБ» г/л в контрольной сыворотке.	65,1	70,6	75,4	67,2	68

Задания

1. Дайте определение воспроизводимости.

2. Рассчитайте и оцените воспроизводимость установочной серии, если в аналитической характеристике к набору реактивов указано, что коэффициент вариации не более 5%.

3. Рассчитайте предупредительные и контрольные границы.

4. По предложенным данным в таблице сделайте вывод о том, можно ли выдавать результаты исследований лечащим врачам.

Эталон ответа к задаче № 23

1. Воспроизводимость - это качество, которое характеризует близость друг к другу результатов исследований, выполненных в различных условиях.

2. V = S : X • 100%, V = 2 : 68 • 100% = 2,91%. Воспроизводимость хорошая.

3. Предупредительные и контрольные границы: Хср±1S: 70, 66; Хср±2S: 72, 64; Хср±3S: 74, 62.

4. Нельзя выдавать результаты исследований пациентов общего белка лечащим врачам за 06.02.04, так как результат общего белка в контрольной сыворотке выходит за пределы Xср.+3S. Необходимо выявить причину ошибки , устранить её, затем повторить анализы пациентов и контрольной сыворотки.