4.4 Исследование набухания митохондрий

Набухание изолированных митохондрий индуцируется открытием mPTP путем внесения в суспензию митохондрий ионов Са²⁺, что приводит к установлению равновесия осмолитов по обе стороны внутренней митохондриальной мембраны и, как следствие, к увеличению объема органелл, величина которого пропорциональна доле митохондрий с открытыми mPTP. Исследование набухания митохондрий проводят, регистрируя интенсивность светорассеяния суспензии митохондрий по изменению величины абсорбции при длине волны 540 нм при 25 ºС. Изменения объема митохондрий (осмотическое набухание) измеряли в среде, содержащей 0,2 моля сахароза, 0,02 моля Трис-HCl, 0,001 моля KH₂PO₄, 2 мкмоля ротенона, 0,005 моля сукцината, рН 7,4. Концентрация митохондриального белка в пробе составляла 1 мг/мл. Добавление 30 мкмолей Са²⁺ приводило к открытию неспецифических мембранных пор митохондрий, что сопровождалось набуханием митохондрий, регистрируемым по убыванию величины абсорбции.

Контрольные вопросы

1. Какие структуры клетки относятся к эжнергопреобразующим мембранам?

2. Охарактеризуйте структурно-функциональную организацию митохондрий.

3. Назовите и охарактеризуйте компоненты митохондриальной дыхательной цепи и дыхательные комплексы.

4. Как формируется и какую функциональную роль играет митохондриальный электрохимический потенциал?

5. Как функционирует и какую роль выполняет митохондриальный дыхательный комплекс V?

6. Как осуществляется митохондриальная секвестрация Ca^{2 +}?

7. Охарактеризуйте митохондриальные поры высокой проницаемости.

8. В каких митохондриальных биохимических процессах образуются активные метаболиты кислорода?

9. Назовите компоненты митохондриальной антиоксидантной защиты.

10. Каков механизм образования NO в митохондриях?

11. Каковы превращения АМК и каковы их мишени?

12. Опишите методику исследования мембранного потенциала митохондрий печени крыс с использованием флуоресцентного зонда сафранина О.

13. Как исследуется респираторная активность изолированных митохондрий клеток печени с помощью полярографического метода?

14. Как оценивается набухание митохондрий?