- •Методы исследования в микробиологии
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом
- •Характеристика уровней биобезопасности
- •Забор, хранение и транспортировка материала для микробиологического исследования
- •Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования (бсми)
- •1 Этап бсми. Забор, хранение и транспортировка материала.
- •2 Этап бсми. Приготовление микропрепаратов.
- •1) Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в убитом состоянии:
- •Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в живом состоянии:
- •Сложные методы окраски клеточных структур бактерий
- •Сравнение электронного и светового микроскопов
- •4 Этап бсми. Заключение.
- •Культивирование микроорганизмов на питательных средах
- •Классификации питательных сред
- •I. По происхождению:
- •II. По составу:
- •III. По консистенции:
- •IV. По назначению:
- •Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
- •Среды для получения изолированных колоний.
- •Среды для накопления чистой культуры.
- •Среды для идентификации микроорганизмов.
- •Признаки колоний микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- •I. Методы механического разобщения бактерий.
- •Методы выделения чистых культур облигатно-анаэробных микроорганизмов
- •Культуральный (бактериологический) метод исследования
- •I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •3 Этап.
- •Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
- •4 Этап.
- •II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •Биохимическая идентификация микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов без выделения чистой культуры
- •Принципы молекулярно-генетического анализа
- •Классификация молекулярно-генетических методов
- •Методы, основанные на изучении фрагментов днк.
- •Методы, основанные на гибридизации нуклеиновых кислот.
- •III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
- •Характеристика стадий пцр
- •IV. Методы анализа амплифицированных фрагментов.
- •V. Методы, основанные на определении последовательности нуклеотидов в днк, рнк и аминокислот в белках.
- •VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.
- •Характеристика штаммов e. Сoli, участсвующих в процессе конъюгации
- •Определение факторов патогенности бактерий
- •5. Капсула.
- •7. Изучение неизвестных токсинов и других факторов патогенности микроорганизмов, механизмы действия которых недостаточно изучены.
- •Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Классификация методов определения
- •Основные понятия
- •Дискодиффузионный метод
- •Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма
- •Метод разведений в агаре
- •Метод разведений в жидких средах
- •Ускоренный метод
- •Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов
- •Генетические методы
- •Состав питательной среды:
- •Величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):
- •Условия инкубации:
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1 Этап эсми. Взятие и обработка материала.
- •2 Этап эсми. Выбор и заражение лабораторного животного.
- •3 Этап эсми.
- •Общие принципы серологического метода исследования
- •Определение активности гуморального поствакцинального индивидуального или коллективного иммунитета;
- •Определение титров диагностических, лечебных и профилактических сывороток;
- •I. Достоинства слми:
- •II. Недостатки слми:
- •Наличие ложных результатов:
- •Общие принципы аллергологического метода исследования
- •I этап алми. Сбор аллергологического анамнеза с целью:
- •Достоинства алми:
- •II. Недостатки алми:
- •Оглавление
Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
I. Методы механического разобщения бактерий.
1. Посев материала на чашки Петри бактериальной петлёй, шпателем, пипеткой, последовательно на несколько сред, не прокаливая инструмент (по Дригальскому). При таком посеве материал, находящийся на петле, расходуется постепенно, и по линиям сетки, нанесённым в конце посева, вырастают изолированные колонии бактерий.
2. Посев пластинчатыми разводками (метод рассева в глубине среды по Коху) применяют, если в исследуемом материале содержится много бактерий. Готовят десятикратные разведения материала в пробирках, затем выливают содержимое пробирок в стерильные чашки Петри, заливают 20 мл расплавленного и остуженного до 450С МПА, перемешивают, дают агару застыть и инкубируют чашки в термостате.
3. Разобщение на основе подвижности бактерий. Материал засевают в каплю конденсационной жидкости скошенного МПА. При этом подвижные бактрии как бы «мигрируют» вверх по агаровому скосу и вырастают в виде колоний, расположенных в верхней части скошенного агара. При 2–3-кратном пассировании этих колоний в конденсационную жидкость скошенного агара удается получить чистую культуру подвижной бактерии (например, протея).
4. Разобщение на основе размеров микроорганизмов используют для получения чистых культур вирусов и микоплазм. Для этого смесь микроорганизмов фильтруют через микро- и миллипористые фильтры. Чистые культуры микроорганизмов получают в фильтрах.
II. Метод заражения чувствительных лабораторных животных (биологический) основан на избирательной чувствительности животных к микроорганизмам различных видов. Это выражается в быстрой скорости размножения определенного вида микроорганизмов при попадании в кровь и внутренние органы животного, откуда их затем выделяют. При этом другие виды микробов погибают под действием защитных факторов организма животного. Так выделяют, например, чистую культуру пневмококков из организма белой мыши, чистую культуру палочки туляремии из организма морской свинки.
III. Методы, основанные на избирательной чувствительности микроорганизмов к воздействию внешних факторов (предварительно или во время культивирования):
а) физических факторов:
- высокой температуры: спорообразующие бактерии родов Clostridium и Bacillus выживают при нагревании смеси микробов, а неспорообразующие - гибнут;
- низкой температуры: при пониженных температурах культивируют Y. enterocolitica, Y. pestis, L. monocytogenes;
б) химических факторов:
- кислот: при обработке кислотой смесей кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий, последние гибнут, а кислотоустойчивые (возбудители туберкулёза) остаются в чистой культуре; использование среды Сабуро (рН 5-6) для выделения грибов;
- щелочей: использование щелочной пептонной воды для выделения V. cholerae; использование метода гомогенизации мокроты с 10% NaOH при выделении M. tuberculosis;
- солей: на элективных средах растут определённые виды бактерий (например, стафилококк растёт на ЖСА, содержащем 10–15% NaCl);
- антибиотиков: основан на избирательной чувствительности определённых видов бактерий к отдельным антибиотикам. При посеве смеси бактерий на среду с добавлением антибиотика, вырастают нечувствительные к нему бактерии: выделение микоплазм на средах с пенициллином, выделение анаэробов на средах с аминогликозидами.
- красителей: красители добавляют к питательным средам для подавления роста сопутствующей флоры: при выделении энтеробактерий в среду Левина добавляют метиленовый синий и эозин для подавления грамположительных бактерий, при выделении микобактерий в среду Левенштейна-Йенсена добавляют малахитовый зелёный.
- специфических ингибиторов: среда с теллуритом калия используется для выделения C. diphtheriae, среда с селенитом натрия используется для выделения Salmonella, среды с желчью используются для выделения энтеробактерий и бактероидов.