- •1. Формы взаимодействия микро– и макроорганизма: мутуализм, комменсализм, паразитизм. Инфекция, её формы, механизмы передачи.
- •2. Понятие «инфекционный процесс», основные характеристики, условия возникновения.
- •3. Понятие «инфекционная болезнь». Условия и динамика развития, периоды.
- •4. Понятие «патогенность» и «вирулентность» микроорганизмов. Факторы патогенности микроорганизмов.
- •5) Способность синтезировать токсины.
- •5 Экзотоксины. Классификация, свойства, механизмы действия
- •6. Эндотоксины. Состав, свойства, механизм действия.
- •7. Понятие «иммунитет». Виды иммунитета. Иммунная система организма человека, структура.
- •8. Антигены гистосовместимости системы hla, их классификация.
- •10. Противовирусный иммунитет, его особенности и отличия от антибактериального иммунитета.
- •11. Неспецифические факторы защиты организма человека. Гуморальные факторы защиты (комплемент, лизоцим, бета-лизины, интерферон и др.).
- •12. Клеточные факторы защиты. Фагоцитоз, стадии, характеристика. Методы определения фагоцитарной активности, фагоцитарный показатель, индекс фагоцитоза.
- •13. Антигены, свойства. Процессинг антигенов макрофагами и в-лимфоцитами.
- •14. Антитела, их структура, свойства, функции. Нормальные показатели иммуноглобулинов сыворотки крови человека.
- •15.Моноклональные антитела. Гибридомы. Практическое использование.
- •16. Т- и в-лимфоциты, морфологическая и функциональная характеристика. Нормальные показатели периферической крови.
- •17. Макрофаги, их морфологическая и функциональная характеристика, роль в иммунном ответе.
- •18. Гиперчувствительность немедленного типа, природа, механизм проявления, методы диагностики.
- •19. Гиперчувствительность замедленного типа, природа, формы проявления, методы диагностики.
- •20. Иммунодефицитные состояния, классификация. Роль инфекции в развитии иммунодефицитов человека.
- •21. Оценки иммунного статуса организма человека (клинико-лабораторные методы).
- •22. Реакция агглютинации, непрямой гемагглютинации
- •23. Реакция преципитации. Её модификации.
- •24. Реакция связывания комплемента.
- •25. Реакция нейтрализации.
- •26. Иммуноферментный анализ.
- •27. Реакция торможения гемагглютинации.
- •28. Реакция фагоцитоза. Практическое использование реакции фагоцитоза при оценке иммунного статуса.
- •29. Молекулярно-генетические методы обнаружения возбудителей инфекции в организме (днк и рнк зондирование, полимеразная цепная реакция).
- •30. Биопрепараты для создания активного иммунитета. Вакцины, анатоксины. Принципы их получения.
- •31. Биопрепараты для создания пассивного иммунитета. Лечебные сыворотки и иммуноглобулины. Принципы их получения.
- •32. Диагностические биопрепараты. Диагностикумы для серологических реакций. Диагностические сыворотки. Принципы их получения.
- •9. Трансплантационный иммунитет. Методы типирования антигенов гистосовместимости при трансплантации тканей.
27. Реакция торможения гемагглютинации.
Многие вирусы обладают способностью агглютинировать эритроциты строго определенных видов млекопитающих и птиц. Так, вирусы гриппа и эпидемического паротита агглютинируют эритроциты кур, морских свинок, человека, а аденовирусы – эритроциты крыс, мышей. В связи с этим для их обнаружения в материале больных или культурах клеток, эмбрионов и животных ставят реакцию гемагглютинации (РГА). Для этого в лунках планшетов готовят двукратно возрастающие разведения вируссодержащих материалов и жидкостей, добавляя к ним отмытые изотоническим раствором взвеси NaCl эритроцитов. Для контроля спонтанной агглютинации эритроциты смешивают ещё с равным объемом изотонического раствора NaCl. Смеси инкубируют в термостате при температуре 37°С или при комнатной температуре.
Результаты РГА учитывают по характеру агглютинации эритроцитов через 30–60 мин, когда они обычно полностью осаждаются в контроле. Положительная реакция обозначается плюсами. «++++» –осадок в виде «зонтика», «+++» – осадок с просветами, «++» – осадок с большими просветами, «+» –хлопьевидный осадок, окруженный зоной скомкованных эритроцитов, и «–» – такой же резко очерченный осадок эритроцитов в виде «пуговицы», как и в контроле
Являясь группоспецифической, РГА не дает возможности определить видовую принадлежность вирусов. Их идентифицируют с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Для ее постановки используют заведомо известные иммунные противовирусные сыворотки, которые в двукратно снижающихся концентрациях разводят в изотоническом растворе натрия хлорида и разливают по лункам. К каждому их разведению добавляют равное количество вируссодержащей жидкости. Контролем является взвесь вируса в изотоническом растворе натрия хлорида. Планшеты со смесью сывороток и вируса выдерживают в термостате 30 мин или при комнатной температуре 2 ч, затем в каждую из них добавляют взвесь эритроцитов. Спустя 30 мин определяют титр вируснейтрализующей сыворотки (т.е. максимальное ее разведение), вызвавшей задержку агглютинации эритроцитов.
Используют РТГА в серологической диагностике вирусных болезней, в частности гриппа и аденовирусных инфекций. Ставить ее лучше так же, как и РН, с парными сыворотками. Четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке подтверждает предполагаемый диагноз
28. Реакция фагоцитоза. Практическое использование реакции фагоцитоза при оценке иммунного статуса.
29. Молекулярно-генетические методы обнаружения возбудителей инфекции в организме (днк и рнк зондирование, полимеразная цепная реакция).
В большей степени методы индикации НК нашли применение в диагностике вирусных инфекций, хотя существуют и спец системы для индикации некоторых прихотливых бактерий (легионелл, хламидий, энтерококков, микобактерий и др).
Наиболее распространены МЕТОДЫ ГИБРИДИЗАЦИИ ДНК И РНК. Принцип: ДНК (и РНК) способны специфически связываться (гибридизироваться) с комплементарными фрагментами искусственно созданных нитей ДНК (РНК), меченых изотопами или ферментами (пероксидаза, ЩФ…). Затем образцы исследуют методом ИФА.
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ. Была предложена в 1983г. Принцип: многократное образование копий (амплификация) определённого участка ДНК с помощью ДНК-полимеразы. ЭТАПЫ:
ТЕРМИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ 2-хнитевой ДНК на отдельные цепочки (93-95°С в течение 30 секунд).
ОХЛАЖДЕНИЕ СРЕДЫ И ВНЕСЕНИЕ ПРАЙМЕРОВ, комплементарных нуклеотидным последовательностям обоих цепочек. Используют синтетические праймеры – олигонуклеиды из 10-20 НКт, взаимодействующих с концами отдельных нитей исходной ДНК. Точнее добавляют 2 праймера (комплиментарны). Взаимодействие праймеров называют ОТЖИГОМ (реакция проходит за 20-60 с при 50-65°С).
Вносят СПЕЦ ТЕРМОСТАБИЛЬНУЮ ПОЛИМЕРАЗУ (оптимум 70°С), к/я синтезирует вторичные копии цепей ДНК (ампликоны).
Полученные 2-хнитчатые ДНК снова подогревают, остужают, вносят праймеры и т.д.
Т.к. полимераза устойчива к воздействию t°С, то нет необходимости постоянно её добавлять. После 30-80 циклов проводят идентификацию ДНК методом электрофореза. Подсчитано, что за 30-40 циклов из 1 матрицы образуется 100.000.000 (100 млн) ампликонов. Для подтверждения принадлежности ДНК возбудителю молекулы можно подвергнуть рестрикции специфическими эндонуклеазами или провести ДНК-гибридизацию. ПЦР – оч чувствительный метод, теоретически достаточно иметь в среде лишь 1 молекулу ДНК.
Для ДИАГНОСТИКИ ИНФ ЗАБ-Й маркёром возбудителя явл его геном. Для амплификации отбирают какой-нибудь УНИКАЛЬНЫЙ ген, наиболее отличающий его от других патогенов.