- •Курск – 2014
- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента к практическому занятию
- •План практических занятий по микробиологии, вирусологии
- •Литература
- •Периодические издания (журналы)
- •Электронное информационное обеспечение и
- •Интернет-ресурсы
- •Электронная библиотечная система медицинского вуза «консультант студента» www.Studmedlib.Ru.
- •Занятие 1
- •Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии
- •Обязанности дежурного
- •Дополнительный материал к занятию Методы обеззараживания отработанного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды
- •Мероприятия при возникновении аварии
- •Порядок действий при возникновении аварийной ситуации
- •Порядок проведения дезинфекционных мероприятий
- •Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов
- •Правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
- •Занятие 2
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 3
- •Структура бактериальной клетки
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 4
- •Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 5
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Методы выделения чистых культур бактерий
- •Методы разобщения микроорганизмов основаны на:
- •Техника посева микроорганизмов на питательные среды
- •Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 7
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 8
- •Выделение чистых культур бактерий (окончание). Изучение ферментативных свойств бактерий. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
- •Оценка степени эпидемической опасности почвы
- •Определение общего числа микроорганизмов
- •Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
- •Микробиологические и паразитологические показатели питьевой воды (согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)
- •Метод мембранных фильтров
- •Бродильный метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 9
- •Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха (окончание). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Некоторые дезинфицируюшие вещества, применяемые в лпу
- •Режимы обеззараживания различных объектов, заражённых патогенными микроорганизмами
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 10
- •Химиотерапия и антибиотики. Бактериофагия
- •Цель самоподготовки
- •Метод серийных разведений
- •Количественные методы или методы титрования бактериофагов
- •Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жидкой питательной среде)
- •Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
- •Фаготипирование бактерий
- •Применение бактериофагов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 11
- •Антибиотики (окончание). Генетика микробов, генная инженерия, биотехнология
- •Цель самоподготовки
- •Техника пцр
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие № 12
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «физиология микробов.»
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Заражение лабораторных животных проводят для:
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 14
- •Иммунитет. Факторы врождённого иммунитета. Антигены
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 15
- •Антитела. Реакции иммунитета: реакция нейтрализации токсинов антитоксинами, реакция преципитации, реакция агглютинации
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 16
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Реакция локального гемолиза в геле
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Иммуноблоттинг
- •Радиоиммунный анализ (риа)
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 17
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Лечебно-профилактические препараты
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 18
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «Учение об инфекции. Иммунологические основыдиагностики лечения и профилактики заболеваний»
- •Контрольные вопросы
- •Частная микробиология
- •Занятие 19 общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 20
- •Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 21
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 22
- •Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Порядок взятия и доставки материала для исследования на холеру
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 23
- •Итог по разделу «возбудители кишечных инфекций»
- •План изучения темы
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 24
- •Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студентов на практическом занятии
- •Занятие 25
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Ускоренные методы диагностики анаэробной газовой инфекции
- •Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 26 микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 27
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 29 микробиологический диагноз зоонозных инфекций – чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 30 микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов
- •Цель самоподготовки
- •Дополнительный материал к занятию Методы диагностики сифилиса Выявление возбудителя
- •Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 31 микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 32 итог по разделу «микробиологическая диагностика зоонозных инфекций, спирохетозов микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов»
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 33 морфология и физиология вирусов. Методы культивирования и обнаружения вирусов. Вирусы – возбудители острых респираторных вирусных инфекций (орви), герпетической инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы определения вида и типа вирусов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Серологический метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 35 возбудители вич-инфекции. Онкогенные вирусы. Возбудители медленных вирусных инфекций. Прионы.
- •Цель самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 36 итог по разделу «медицинская вирусология».
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 37
- •Работа студента на практическом занятии
- •Экзаменационные вопросы по микробиологии, вирусологии
- •I раздел
- •II раздел
- •III раздел
Техника посева микроорганизмов на питательные среды
Посев уколом осуществляется уколом микробиологической петлей или иглой в столбик плотной или полужидкой питательной среды. Применяется для выращивания анаэробов, для выявления характера роста по ходу укола и для определения газообразования. У подвижных и неподвижных микроорганизмов характер роста будет различным. Посев уколом практикуют также для длительного хранения культур.
Посев петлёй (посев штрихами) по методу Гольда. На внешней стороне дна чашки Петри с питательным агаром проводят разграничительные линии, разделяющие её на 4 сектора. Исследуемый материал вносят петлёй в первый сектор и проводят ею параллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой же петлёй, не изменяя её положения по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток, рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах с небольшим количеством клеток микроорганизмы вырастают в виде отдельных колоний.
Посев шпателем по методу Дригальского. Используют 3 чашки Петри с питательной средой. На 1-ю чашку петлёй или пипеткой наносят каплю исследуемого материала и растирают стерильным шпателем по всей поверхности питательного агара. Затем шпатель, не обеззараживая, переносят во 2-ю чашку и втирают оставшиеся на нём микроорганизмы в поверхность питательной среды. Далее шпатель переносят в 3-ю чашку и аналогичным образом производят посев. На 1-й чашке вырастает максимальное количество колоний, на 3-й – минимальное. В зависимости от содержания микробных клеток в исследуемом материале на третьей или на второй и третьей чашках вырастают отдельные колонии, пригодные для выделения чистой культуры.
Посев по методу Шукевича. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду свежескошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются по агару, как бы «вползают» на его поверхность. Отсевая материал из верхнего края роста культуры в конденсационную воду свежескошенного агара и повторяя это несколько раз, можно выделить чистую культуру.
Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
Микроанаэростат – используется для создания вакуума с дозированным содержанием кислорода. Прибор представляет собой герметически закрывающийся сосуд, снабжённый манометром, в который помещают посевы и откачивают воздух. Микроанаэростат помещают в термостат.
Эксикатор – стеклянный лабораторный сосуд с притёртой крышкой. В его донной части имеется дополнительная ёмкость, куда наливается смесь пирогаллола и едкого натра или гидросульфита натрия и двууглекислой соды. На сетку-подставку помещают посевы и притирают крышку с помощью вазелина. Эксикатор помещают в термостат.
Метод Фортнера. В чашку Петри наливают питательный агар с 1-2% глюкозы. Посредине чашки стерильным скальпелем вырезают канавку шириной приблизительно 1 см. Одну половину чашки засевают культурой аэробов (сарцина, кишечная палочка), вторую – культурой анаэробов или исследуемым на их наличие материалом. Засеянную чашку закрывают, герметизируют и помещают вверх дном в термостат. Быстрорастущие аэробы, поглощая кислород, создают тем самым благоприятные условия для роста анаэробных микроорганизмов.
Метод Перетца. В стерильную чашку Петри помещают стеклянные палочки, на которые кладут стеклянные пластинки или предметные стёкла. В пробирку с 20 мл расплавленного и охлаждённого до 50° МПА с 10% глюкозы (pH 7,0-7,2) вносят исследуемый материал и добавляют 2-4 капли 10% гидросульфита натрия на 10% растворе углекислой соды. Содержимое пробирки быстро перемешивают и выливают в чашку с таким расчётом, чтобы агар заполнил пространство между стеклянной пластинкой и дном чашки. Чашки инкубируют при 37° 24-48 часов. Колонии анаэробов вырастают под стеклянной пластинкой.
Метод Вейон-Виньяля. В пробирку с 0,5% расплавленным и охлаждённым до 40-45° сахарным агаром вносят исследуемый материал и перемешивают. При необходимости материал разводят путём переноса в последующие 2-3 пробирки с расплавленным агаром. Содержимое пробирок набирают в пастеровские пипетки. После заполнения пипетки вытянутый конец запаивают, а противоположный конец закрывают стерильной ваткой и заливают парафином. Трубки помещают в термостат; через 2-3 суток в агаре вырастают глубинные колонии, видимые в проходящем свете, которые можно изолировать. Для этого трубку надрезают напильником выше уровня намеченной колонии, надламывают, а колонию извлекают петлей и пересевают для накопления чистой культуры в соответствующую питательную среду.
Метод Биттнера. К крышке чашки Петри с посевом исследуемого материала или выделенной культуры анаэробов прикрепляют пакет из фильтровальной бумаги, содержащей пирогаллол, К2СО3 и тальк. Чашку герметизируют при помощи парафина или скотча. Содержимое пакета увлажняется за счёт образующегося конденсата, и ингредиенты вступают в реакцию, которая сопровождается поглощением О2 и выделением СО2.
Газ-пак (Generbag anaer). Система Generbag anaer состоит из воздухонепроницаемых пакетов, изготовленных из прозрачной пластмассы и генераторов, содержащих смесь веществ, поглощающих кислород. Последовательность работы: вынуть генератор из пакета, поместить в нижнюю часть воздухонепроницаемого пакета, затем поместить чашки (или пробирки) с посевами и с помощью специальной скрепки закрыть пакет. Инкубация при 37°.
Среда Китта-Тароцци. Содержит мясо-пептонный бульон, 0,5% глюкозы и 0,15% агара. На дно пробирки для адсорбции О2 помещают кусочки варёной печени или фарша слоем 1-1,5 см и заливают 6-7 мл среды. Среду перед посевом регенерируют (прогревают 15-20 мин. на водяной бане для удаления воздуха, а затем быстро охлаждают). После посева среду заливают вазелиновым маслом и помещают в термостат.
Полужидкий сахарный агар (высокий столбик). В пробирку с 6-7 мл расплавленного и охлаждённого до 40-45° полужидкого питательного агара, содержащего 0,5-1% глюкозы, вносят исследуемый материал и перемешивают. Посевы помещают в термостат.
Среда для контроля стерильности (СКС). Рост многих анаэробных микроорганизмов возможен только на средах с низким окислительно-восстановительным потенциалом. Поэтому в среды добавляют восстановители, например, тиогликолевую кислоту или её натриевую соль, цистеин, аскорбиновую кислоту. Функции восстановителей выполняют и другие компоненты среды: глюкоза, пептон. СКС содержит питательный бульон, витаминный препарат ЭКД, NaCl, Na2CO3, глюкозу, тиогликолят натрия, цистеин, агар (0,75%). Среду разливают в пробирки по 6-7 мл.