- •Процессы репликации и транскрипции
- •Основные принципы репликации.
- •Особенности днк-полимеразы I.
- •Холофермент, днк-полимераза III, реплисома.
- •Элонгация
- •Терминация репликации
- •Репликация эукариот
- •Вырезание оснваний. Гликозилазы. Вырезание (эксцизия) повреждённых нуклеотидов. Комплекс ферментов, осуществляющих эксцизионную репарацию.
- •Механизм репарации неспаренных нуклеотидов. Выбор репарируемой нити днк.
- •Репарация двухнитевых разрывов: гомологичная пострепликативная рекомбинация и объединение негомологичных концов молекулы днк.
- •Транскриптоны прокариот. Строение промотора прокариот, структурные элементы.
- •Регуляторные элементы эукариот: цис-элементы, транс-действующие факторы. Тата-бокс, саат-бокс, gc-мотивы, энхансеры, сайленсеры.
- •Траскрипция генов класса I. Транскрипция генов класса II. Транскрипция генов класса III.
- •Базальные факторы транскрипции для рнк-полимеразы II. Формирование белкового комплекса на промоторе. Факторы элонгации и терминации.
- •Элонгация.
- •Процессинг рРнк у эукариот. Процессинг тРнк.
- •Процессинг мРнк. Модификация 5’-конца (кэпирование). Модификация 3’-конца (полиаденилирование). Сплайсинг первичных транскриптов мРнк, сплайсосома. Автосплайсинг. Альтернативный сплайсинг.
- •Редактирование рнк (эдитинг).
Элонгация
ДНК-полимеразы не могут начинать синтез ДНК на матрице «с нуля», а способны только добавлять новые дезоксирибонуклеотиды к 3’-концу уже имеющейся полинуклеотидной цепи. Такую ранее образованную небольшую цепь, к которой добавляются нуклеотиды, называют «затравкой» или праймером, она состоит из рибонуклеотидов. Праймер синтезирует из рибонуклеотидтрифосфатов фермент ДНК-праймаза (DnaG). Праймазную активность может проявлять либо отдельный фермент, либо одна из субъединиц ДНК- полимеразы. Праймаза связывается с хеликазой и ДНК, формируя праймосому. РНК-праймеры удлиняются ДНК-полимеразой III, которая, вытесняя SSB, начинает строить новую цепь ДНК, последовательно присоединяя к праймеру дезоксирибонуклеотиды. Полимеризация протекает путем присоединения мононуклеотидов к З’-ОН-группе затравки. Матрица (материнская ДНК) определяет выбор ферментом нуклеотида соответственно правилам комплементарности: А спаривается с Т, Г - с Ц. Рост цепи происходит в направлении 5 ’—3’. ДНК-полимераза специфически нуждается в 5’-трифосфатах дезоксирибонуклеозидов, 5’-дифосфаты и 5’-монофосфаты неактивны. Неактивны также 5’-трифосфаты рибонуклеозидов. Для реакции требуются ионы Mg2+.
Антипараллельная структура двух цепей молекулы ДНК создает ряд проблем для репликации. По мере движения вилки одновременно должны синтезироваться две дочерние цепи. Вилка движется в направлении от 5’ к 3’ на одной цепи и от 3’ к 5’ - на другой. Однако нуклеиновые кислоты синтезируются только от 5’ к 3’-концу. Проблема решается таким образом, что на одной из родительских цепей цепь синтезируется непрерывно в направлении 5’-3’, что совпадает с движением вилки репликации. Это лидирующая (или ведущая) цепь. Другая цепь - отстающая (запаздывающая) - растет за счет синтеза ДНК-полимеразой III коротких фрагметов также от 5’ к 3’, однако они синтезируются в направлении, противоположном движению вилки, причем синтез каждого начинается с построения отдельного праймера. Длина фрагментов составляет 1000-2000 пн. Они названы «фрагментами Оказаки» по имени открывшего их ученого. Фрагменты Оказаки отстающей цепи сшиваются, образуя непрерывную цепь. Это требует активности двух ферментов: ДНК-полимеразы I и ДНК-лигазы. На отстающей цепи ДНК-полимераза I продолжает синтез ДНК после отделения ДНК-полимеразы III в направлении 5’-3’ одновременно удаляя праймер. После замены всех нуклеотидов РНК на нуклеотиды ДНК между двумя фрагментами ДНК остается разрыв, который зашивается ДНК-лигазой.
Известно, что ключевые белки процесса репликации тесно ассоциированы и формируют «репликационную машину»/реплисому, с определенным расположением петель ДНК и ферментов. Отстающая цепь изгибается так, что ее ДНК-полимераза III комплексирует с ДНК-полимеразой III лидирующей цепи. Этот изгиб подводит 3’-конец каждого, уже синтезированного фрагмента Оказаки к участку, в котором начинается синтез нового фрагмента Оказаки. Комплекс «праймаза-хеликаза» движется вместе с вилкой репликации, синтезируя новые РНК-праймеры. ДНК-полимераза III на отстающей цепи используется вновь и вновь, продвигаясь вперед вместе с вилкой. Таким образом, ДНК синтезируется одинаково эффективно на обеих матричных цепях.